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鸣禽能够产生丰富的鸣唱语句,研究这种发声行为的神经基础对揭示人类语言行为的形成机制具有重要的意义。但对鸣禽鸣唱行为的研究多集中于鸣唱简单的可以人工繁殖的种类,而针对野生鸣禽进行研究对揭示鸣唱行为及其神经结构的特点更有意义。
本研究对象----蒙古百灵(Melanocorypha mongolica)隶属百灵科,能够产生复杂多变的鸣唱,成年后依然具有学习鸣唱语句的能力,不能人工繁殖,是典型的野生鸣禽。我们通过对其鸣唱行为进行研究并与以往的研究比较发现,雄性蒙古百灵鸣唱行为在所研究过的鸣禽中是最复杂的,与此对应的是其发声控制核团的体积也是最大的之一,并且核团间具有丰富的神经联系。而对雌性蒙古百灵的研究发现,虽然其不鸣唱,但是与以往研究不同的是,雌蒙古百灵依然具有明显的发声控制核团,核团之间也有丰富的神经联系,因此我们推测发声控制核团不仅和鸣唱行为有关,可能也具有其它的作用,这些结果为鸣禽的鸣唱行为及发声控制核团的作用提供了新的证据。鸣禽的鸣唱行为和发声控制核团均存在显著的性双态现象,但是其产生机制却是未知的,以往的研究认为雌激素、雄性高表达基因、神经营养因子等可能都参与鸣禽性双态的形成。我们的实验首次发现ERBIN和ERBB2可能参与鸣禽性双态形成。首先通过检测性双态形成的高峰期PD15白腰文鸟HVC核团ERBB2和ERBIN的mRNA的表达,确定了这两个基因的表达在鸣禽HVC核团中存在明显的性别差异,通过离体培养验证了ERBB2促进HVC中的细胞增殖和分化并且证明ERBB2受到雌激素的正调控作用,而雌激素对ERBIN没有调控作用。为了直接验证ERBB2、ERBIN以及有研究表明可能参与性双态形成的BDNF对鸣禽性双态发育的作用,我们设计应用质粒介导的RNAi技术进行研究。本实验成功构建了稳定表达白腰文鸟这三个基因的293细胞系,并得到了可以有效抑制鸟类ERBB2、ERBIN及BDNF表达的shRNA片段,通过活体和离体电转染验证了这些干扰质粒在鸟脑中可以正常表达。通过离体电转染我们初步验证了ERBB2对HVC对应VZ区细胞增殖有影响,推测ERBB2有可能通过调节细胞增殖、分化影响鸣禽性双态的形成。这些结果为我们深入了解发声控制核团性双态产生的分子机理奠定了基础。