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背景与目的前列腺癌是常见的男性恶性肿瘤之一，晚期前列腺癌经抗雄激素治疗6～18个月后，80%进展为雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)，至今还没有能治愈AIPC的疗法。目前针对AIPC治疗的实验研究也进展缓慢，尚无明显突破。因此，探索新的治疗方法以走出目前AIPC治疗的困境是非常有必要的。基于溶瘤腺病毒的病毒-基因治疗成为肿瘤治疗研究热点，为AIPC的治疗提供了一种可行的方法。我们在前期实验中以rPB为基础构建了rPB-DR(6)启动子，该启动子保持了前列腺组织特异性，同时可以对维甲酸－维甲酸受体复合物起反应。由于所有的前列腺癌均表达维甲酸受体，在维甲酸存在时，rPB-DR(6)启动子可特异性地在所有类型的前列腺癌细胞(包括AIPC)中起作用，驱动下游基因表达，故该启动子可用于构建针对AIPC的溶瘤腺病毒。因此本研究拟制备rPB-DR(6)调控的溶瘤腺病毒，同时使其携载自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)进一步增强抗肿瘤作用，观测其对包括AIPC在内的前列腺癌细胞的杀伤作用。方法以pUC119-rPB-DR(6)和pCD2为模板，PCR法扩增出rPB-DR(6)启动子和CD基因，将rPB-DR(6)启动子插入到腺病毒早期基因E1A之前，同时插入mCMV启动子驱动的CD基因，构建出重组质粒p55-rPB-DR(6)-mCMV-CD(简写为p55-rPC)，鉴定后将质粒p55-rPC与腺病毒骨架质粒pPE3共转染293细胞并包装出重组溶瘤腺病毒Ad5-rPB-DR(6)-mCMV-CD，简称Ad5-rPC，扩增、纯化并测定滴度。采用Ad5-rPC感染雄激素依赖和非依赖性前列腺癌细胞，Western Blot检测病毒早期基因E1A和自杀基因CD蛋白表达水平，TCID50法检测重组腺病毒Ad5-rPC感染癌细胞细后的复制能力，并应用CCK-8法检测重组病毒Ad5-rPC对前列腺癌细胞的特异性杀伤能力。结果经酶切、PCR及测序鉴定证实成功构建了包含rPB-DR(6)启动子和CD基因的重组溶瘤腺病毒Ad5-rPC，制备的重组溶瘤腺病毒Ad5-rPC滴度为1.1×1011pfu/mL。Ad5-rPC病毒感染前列腺癌细胞，Western Blot法检测到E1A和CD蛋白阳性表达。Ad5-rPC感染前列腺癌细胞系产生的子代病毒滴度均大于3.0×106pfu/mL，CCK-8法证实重组腺病毒对雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞均具有特异性杀伤能力，杀伤能力均大于65%。结论(1)成功制备了对前列腺癌细胞具有靶向特异性杀伤作用的重组溶瘤腺病毒：以rPB-DR(6)为主要调控元件，实现重组溶瘤腺病毒对前列腺癌的靶向特异性，并采用自杀基因CD进一步增强溶瘤腺病毒的肿瘤杀伤作用。(2)体外实验证实了重组溶瘤腺病毒Ad5-rPC对雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌均具有特异性杀伤作用，为攻克AIPC这一治疗难题提供了一种潜在可行的新方法。