金银花与山银花药材的NIR快速检测及其品质评价研究

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在2010版中国药典中,金银花的基原植物为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb,山银花来源于忍冬科植物灰毡毛忍冬L. macranthoides Hand.-Mazz.、红腺忍冬L. hypoglauca Miq.、华南忍冬L. confusa DC.或黄褐毛忍冬L. fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng的干燥花蕾或带初开的花。金银花和山银花同科同属,药材质量受产地、加工方法等多种因素影响,参差不齐,差异较大,且外观性状接近,不易鉴别。现代定量分析方法如高效液相色谱法等存在着诸如繁琐费时、分析成本高、在实际工作中较难推广等问题。因此,亟需一种简便、快速的质量分析方法,能够准确、快速地检测其质量。此外,两者的品质也亟待进行系统评价。近红外光谱(NIR)技术具有无损、快速、绿色的优势,本研究借鉴其在定量检测方面的应用,力图实现金银花和山银花药材质量快速检测的目的。此外,基于NIR建模需要大量有代表性的样本,从化学角度,以金银花和山银花中主要化学成分,包括有机酸类、黄酮类、皂苷类成分为评价指标,分析不同产地、加工方法的金银花和山银花之间的质量差异,并系统评价金银花与山银花不同种之间化学成分的差异;最后,从化学和分子水平两个角度,进行不同种之间距离远近的聚类分析,并作出金银花与山银花药材品质进行系统评价。主要研究成果如下:(1)调查全国各地金银花和山银花主产区,收集干花样品。优选具有代表性的70份忍冬、70份灰毡毛忍冬、70份红腺忍冬、55份黄褐毛忍冬、25份华南忍冬为试验材料,采用HPLC法检测其绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C等有机酸成分含量,采用近红外漫反射技术扫描获得近红外光谱,经过样本划分,变量筛选,利用SiPLS建立光谱和化学值之间的定量校正模型,并对模型进行评估。结果表明,15个局部定量模型和3个山银花总体模型(绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C)都达到较好预测水平,其中,13个预测模型R2达到0.8以上,拟合度高,且校正均方根误差和预测均方根误差也在合理范围,能够实现金银花和山银花中绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C含量的快速检测。(2)以220份山银花为试验材料,采用2010版中国药典方法,测量其灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量。结果表明,山银花中这两个成分非常丰富,灰毡毛忍冬皂苷乙含量最高达13.252%,川续断皂苷乙的含量最高达14.620%;不同种之间也存在较大差异,其中,灰毡毛忍冬和华南忍冬中灰毡毛忍冬皂苷乙含量远高于川续断皂苷乙含量;红腺忍冬中两种皂苷成分含量接近;黄褐毛忍冬中未检测到灰毡毛忍冬皂苷乙,但川续断皂苷乙含量很高。(3)以有机酸(绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C)和黄酮类(芦丁、木犀草苷、槲皮素)为指标,评价不同产地和不同加工方法对金银花药材质量的影响;以有机酸绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C)和皂苷类成分(川续断皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷乙)为指标,评价不同产地和不同加工方法对灰毡毛忍冬、华南忍冬、红腺忍冬、黄褐毛忍冬药材质量的影响;以有机酸、黄酮类、皂苷类成分为指标,综合评价金银花和山银花不同种之间的质量差异。结果表明:①金银花受产地影响不大,山银花中马山地区红腺忍冬优于忻城地区,秀山地区灰毡毛忍冬优于隆回和溆浦地区;②无论金银花还是山银花,加工方法对其质量的影响较大,其中,杀青烘干和烘干等现代加工方法的药材质量优于传统加工方法,并且加工方法对有机酸类和成分影响较大,但对皂苷类成分含量影响不大,对黄酮类成分影响有待进一步研究。(4)对金银花与山银花5个种,8种化学成分进行主成分分析,结果表明,5个种可以分开,芦丁、木犀草苷、槲皮素和川续断皂苷乙为特征成分,具有高度正相关性。本研究认为,芦丁、木犀草苷、槲皮素三个化学成分是金银花区别于山银花的特征成分,川续断皂苷乙是山银花区别于金银花的特征成分。(5)采用聚类分析、EST-SSR对金银花和山银花不同种之间进行分析,并且对比化学聚类和分子聚类结果。结果表明,两种聚类结果不完全一致,化学聚类表明灰毡毛忍冬和华南忍冬距离最近,其次是和红腺忍冬,然后是忍冬,与黄褐毛忍冬距离最远;分子聚类将山银花和金银花分成两类,灰毡毛忍冬和华南忍冬距离最近,其次是红腺忍冬,然后是黄褐毛忍冬,与忍冬距离最远。
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