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帕金森症是一种中老年人常见的神经退行性疾病,氧化胁迫是其重要的发病机制之一。槲皮素具有抗肿瘤与抗炎、抗菌、改善心血管状况,抗氧化及抑制神经细胞凋亡等广泛的生物活性,其是否可用于防治神经退行性疾病值得探讨。本研究旨在借助现代细胞学技术,检测槲皮素对鱼藤酮诱导的细胞氧化胁迫及凋亡的保护作用,以期从微观角度了解其作用活性及其机制,从而为帕金森症的防治提供一定的理论基础。本文以鱼藤酮诱导的U87细胞作为损伤模型,以槲皮素作为保护剂,通过台盼蓝排染法、MTT检测、吉姆萨染色、Hoechst 33324核染色、吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染、Annexin V/PI双染、PI染色、DCFH-DA、Rhodamine 123荧光染色等方法,检测了鱼藤酮单独作用及经槲皮素预处理时U87细胞增殖、凋亡与细胞周期、细胞内活性氧与线粒体膜电位的变化,探究槲皮素对鱼藤酮诱导的细胞凋亡的保护机制,以期为槲皮素的进一步合理应用提供科学依据。结果如下:1.台盼蓝排染法及MTT法检测细胞毒性结果显示,鱼藤酮对U87细胞具有显著的生长抑制效应,作用存在剂量-时间效应。而槲皮素在1μM、10μM、50μM时对细胞没有毒性,在10μM与鱼藤酮共同作用时能显著抑制鱼藤酮引起的细胞存活率降低。2.倒置显微镜形态观察结果显示,鱼藤酮作用可以引起U87细胞形态发生显著改变,细胞胞体收缩,细胞变圆、部分失去贴壁能力。但用槲皮素预处理之后,这些特征有一定的缓解。3.吉姆萨染色、Hoechst 33324荧光染色以及AO/EB双染实验结果显示,鱼藤酮作用使细胞核出现染色质凝集、核碎裂,表现出明显的凋亡性特征,槲皮素预处理后凋亡细胞数量减少。4.Annexin V/PI双染和PI染色经流式细胞仪分析结果显示,鱼藤酮引起细胞磷脂酰丝氨酸(PS)外翻和细胞膜通透性改变,出现了早期和晚期凋亡,并且将细胞阻滞在G2期,经槲皮素保护后,细胞凋亡率及G2期阻滞有所降低。5.DCFH-DA、Rhodamine 123染色后经流式细胞仪检测以及荧光显微镜观察胞内ROS及线粒体膜电位的变化情况,结果显示鱼藤酮处理细胞3 h、6 h、12 h,胞内ROS含量与对照相比升高;线粒体膜电位与对照相比降低,并随着时间延长而持续降低。而槲皮素的加入可以抑制鱼藤酮引起的细胞内ROS含量升高,线粒体膜电位下降。本研究中多个指标证实,槲皮素在鱼藤酮诱导的U87细胞凋亡模型中通过提高U87细胞存活率,保护细胞骨架,降低ROS产生,升高线粒体膜电位,进而达到抑制凋亡的目的。