三聚氰胺的遗传毒效应及牛奶中三聚氰胺快速检测方法研究

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三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环化工原料,因其含氮量高达66.6%,所以被非法添加到蛋白类食品、饲料甚至牛奶中,从而导致了2007年美国的宠物中毒事件以及2008年震惊中外的三鹿奶粉事件,社会反响极其恶劣。尽管有关三聚氰胺的急性毒性,亚慢性毒性和慢性毒性研究较多,但都集中在泌尿系统,对其遗传毒效应的研究报道却很少,此外,传统的三聚氰胺色谱检测方法和目前研发的拉曼散射,荧光,吸收光谱等光学检测法,均因仪器昂贵,操作繁琐,无法满足现场检测要求。因此,本论文深入研究了三聚氰胺及其主要代谢产物三聚氰酸的遗传毒效应,为探明三聚氰胺对人体健康的影响提供了科学依据;同时,利用的纳米金和适配体修饰的纳米金为传感器,开发了三聚氰胺简便、快速的检测方法,为严格控制和监管三聚氰胺的滥用情况提供了技术依托。主要研究结果如下:采用不同浓度的三聚氰胺进行Ames试验,无论有没有大鼠肝匀浆S-9混合液,其对TA97,TA98,TA100,TA102四种菌株的诱变回变菌落数均没有超过自发回变菌落数的2倍(MR小于2)。在Ames试验的基础上,又进行三聚氰胺的仓鼠卵巢细胞(CHO)染色体畸变试验,结果表明,各剂量组的细胞畸变率与阴性对照组相比,无显著性差异(χ2=1.05,P>0.05)。说明三聚氰胺在试验剂量范围内,对体外的哺乳动物细胞没有致畸变效应。论文还研究了三聚氰胺及其主要代谢产物三聚氰酸对小鼠胸骨骨髓嗜多染红细胞的微核效应。实验中分别以400、800、1600mg/kg3个不同剂量水平的三聚氰胺及其代谢产物三聚氰酸进行腹腔注射染毒健康小鼠,观察并计数嗜多染红细胞的微核率,统计分析结果显示三聚氰胺和三聚氰酸各剂量组的微核率与阴性对照相比无显著差异。结果表明三聚氰胺、三聚氰酸无明显致突变效应。而单细胞凝胶试验结果表明,三聚氰胺对小鼠精子细胞的DNA有比较明显的损伤。可得出结论,尽管三聚氰胺对哺乳动物体内外细胞没有明显的诱导作用,却可以直接作用于精子细胞,对精子细胞DNA造成损伤。论文利用纳米金可以被三聚氰胺聚集,同时溶液的颜色会由红变蓝这一特性,设计了一种快速、可视的检测方法,来检测牛奶中的三聚氰胺。通过样品前处理及反应条件的优化,本方法检测全程只需要20分钟,肉眼可视检测下限为1μM,借助仪器的检测下限低于375nM。此外,还研究了纳米金与三聚氰胺的反应原理,为未来通过修饰纳米金来设计三聚氰胺检测传感器奠定了基础。适配体可以通过分子间作用力及疏水作用包裹在纳米金表面。当三聚氰胺加入体系中,会通过氢键竞争结合适配体,使得失去保护的纳米金颗粒在PDDA的作用下产生聚集,同时溶液颜色发生相应改变。根据这一原理,我们设计了基于适配体修饰的纳米金的生物传感器,用来检测牛奶中三聚氰胺,其检测下限是34nM,加标回收率介于90%到120%之间。因为本传感器稳定性和灵敏度都高于纳米金传感器,所以我们希望此传感器的设计和建立过程可以为其它大分子污染物检测方法的建立提供帮助。
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