论文部分内容阅读
合生元是由益生元和益生菌组成的微生物制剂，益生菌与益生元两者的种类、数量以及其生理功效都是影响合生元免疫调节功能的重要因素。因此，研究水苏糖-乳酸菌合生元的免疫调节功效及水苏糖增殖乳酸菌的机制对新型合生元的开发具有理论指导意义。本研究从新疆地区不同酸奶中的分离出19株优势乳酸菌，利用生理生化试验结合16S rRNA序列同源性分析，对菌种进行了鉴定。通过单因素实验和正交试验获得了水苏糖对其中一株植物乳杆菌RB1增殖的最适碳源、水苏糖添加量和添加时间。制备水苏糖-植物乳杆菌合生元制剂，研究其对免疫低下和正常小鼠的免疫调节功效。进一步测定了添加水苏糖对RB1发酵液中残糖量、乳酸含量、能量代谢关键酶活性以及细胞活性的影响，来探究水苏糖对RB1的增殖机制。主要研究结果如下：一、新疆酸奶中优势乳酸菌的分离与鉴定。分离并鉴定了19种优势乳杆菌，其中有10株发酵乳杆菌，4株植物乳杆菌，4株干酪乳杆菌及1株戊糖乳杆菌。二、水苏糖对植物乳杆菌RB1的增殖条件优化。选择RB1作为合生元的益生菌，通过正交试验得出较优增殖条件为：以乳糖为碳源，发酵4小时后添加0.6%的水苏糖。优化后发酵液中RB1活菌数为1.860×1010cfu/mL，是优化前2.19×109cfu/mL的8.49倍。三、水苏糖-植物乳杆菌合生元对免疫低下小鼠的免疫调节功效。试验结果显示，合生元能显著提高小鼠单核巨噬细胞吞噬功能；增强免疫低下小鼠迟发型超敏反应；促进绵羊红细胞所致的免疫正常小鼠溶血素生成；显著提高免疫低下小鼠脾脏和胸腺指数；提高免疫低下小鼠血清中IL-10、TNF-α和IgG的含量；对血清中IL-12含量无显著影响。这表明合生元能显著改善免疫低下小鼠的特异性细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能，提高免疫器官指数和血清中部分免疫因子水平，增强免疫力低下小鼠免疫功能。四、水苏糖-植物乳杆菌合生元对免疫正常小鼠的免疫调节功效。试验结果显示，合生元能显著增强正常小鼠迟发型超敏反应；促进正常小鼠血清溶血素生成；显著提高小鼠脾脏和胸腺指数；显著提高小鼠血清中IL-10、IL-2、TNF-α、IgM和IgG的含量；对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能无显著影响。因此，合生元能显著增强正常小鼠的特异性细胞免疫和体液免疫，提高免疫器官指数和血清中部分免疫因子水平，增强免疫正常小鼠机体免疫功能。五、水苏糖对植物乳杆菌RB1的增菌机制。试验结果显示，水苏糖增加了RB1对碳源的利用率和乳酸的生成量，提高了α-半乳糖苷酶、乳酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶的活性以及细胞代谢活性。由此得出，水苏糖对能量代谢过程中关键酶的活性以及细胞活性的提高可能是其对RB1增殖的重要原因。