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细胞凋亡是由体内外因素触发细胞内预存的死亡程序而导致的细胞死亡过程,是多细胞生物维持自身稳定的重要机制。卵泡闭锁的本质是颗粒细胞和卵母细胞的凋亡。转录因子Foxo1主要通过转录调控和信号转导途径在动物的生长发育、代谢和细胞周期、凋亡等方面起重要作用。本实验主要通过构建FOXO1真核表达质粒,在小鼠颗粒细胞中过表达FOXO1,从而研究Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响,探索卵泡闭锁的分子机理。
实验结果表明:①正常情况下,小鼠颗粒细胞表达Foxo1蛋白,Foxo1在颗粒细胞中的分布与其磷酸化状态紧密相关,未磷酸化的Foxo1蛋白位于细胞核中,而磷酸化的Foxo1蛋白明显出核,位于细胞质中;②通过脂质体转染成功实现了外源FOXO1基因在小鼠颗粒细胞内的表达;③转染36小时后,颗粒细胞形态发生变化,AnnexinV-PI细胞凋亡染色和Caspase-8活性测定说明FOXO1过表达促进颗粒细胞凋亡,并依赖于FOXO1与DNA的结合;④Real-time PCR结果表明FOXO1的过表达提高了颗粒细胞TRAIL、FasL、Bim、Caspase-3基因的mRNA水平表达量。
研究证实,转录因子Foxo1在颗粒细胞凋亡过程中起重要作用,且Foxo1的促凋亡作用可能是通过直接或间接调控TRAIL、Fas L、Bim、Caspase-3基因的表达量,因而Foxo1可能参与了卵泡闭锁的调控,在卵泡闭锁过程中起重要作用。