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目的傣医解"食物毒"是"雅解"理论的重要组成部分,近年来,在"雅解"理论指导下的解"食物毒"及其方药一直是傣医药领域研究的重点和热点。研究发现"食物毒"与食物过敏密切相关;"雅解沙把"是解"食物毒"方药之一,临床观察及实验研究均证实其有较好的解"食物毒"作用,但目前研究尚不能全面揭示其解"食物毒"作用机理。故在前期研究的基础上,本研究拟达到以下目的:1运用统计学方法对傣医解"食物毒"单、验方的规律进行分析,以期证实傣医"食物毒"与食物过敏有相关性,食物过敏是最能体现"食物毒"内涵的疾病之一;"雅解沙把"是解"食物毒"代表方;肠道是研究解"食物毒"的角度或途径,从而为开展实验研究及临床运用提供依据。2根据上述理论研究,基于食物过敏小鼠模型,从肠黏膜屏障的生物屏障、物理屏障、免疫屏障为切入点研究傣药"雅解沙把"抗食物过敏可能的作用机制,从而揭示其解"食物毒"的作用机制。方法1理论研究运用文献分析法收集解"食物毒"相关"雅解"单方、验方,并进行规范化整理。运用频数分析法对其使用的药物进行统计分析,分析总结其类别、性、味、归塔,主治类别、主治范围及主治症状等方面的频数结构及分布情况。在对药物进行频数分析的基础上,运用聚类分析法对药物类别进行聚类分析。2实验研究2.1复制卵清蛋白过敏小鼠模型40只BALB/c雌鼠,6-8周龄,随机分为正常对照组、OVA模型组、"雅解沙把"低剂量组(0.39g/kg)、"雅解沙把"中剂量组(1.17g/kg)、"雅解沙把"高剂量组(3.51g/kg)。小鼠于实验第0天腹腔注射致敏液(10μgOVA加1mg氢氧化铝),第14天腹腔注射致敏液(含10μgOVA),第30天、34天灌胃致敏液(含80mgOVA)。正常对照组用超纯水代替进行致敏和激发。2.2药物干预实验在实验第30天-34天予OVA灌胃激发前1小时,对药物干预组小鼠以灌胃方式给予"雅解沙把"低、中、高剂量治疗;正常对照组和模型组小鼠以灌胃方式给予生理盐水治疗,共5天。2.3 卵清蛋白过敏模型评价指标检测在两次OVA灌胃激发后1小时内,观察各组小鼠过敏症状、腹泻情况。在末次OVA灌胃激发1小时后,取血清标本,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测特异性OVA-IgE水平。2.4 肠道菌群结构检测实验末取小鼠粪便液氮中冻存,利用Illumina高通量测序平台对各组小鼠粪便标本中的16S rRNA gene V3-V4区进行定性分析,探索小鼠肠道菌群结构的变化。2.5 肠黏膜通透性检测采用荧光定量PCR方法检测小鼠空肠紧密连接蛋白Occludin mRNA、Claudin 3 mRNA的含量。2.6 肠黏膜免疫检测采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清IL-4、IFN-γ、IL-4/IFN-γ及小鼠肠黏膜sIgA水平;荧光定量PCR方法检测小鼠空肠IL-17、TGF-β1、TGF-β1/IL-17mRNA的含量。结果1 解"食物毒"方药物规律分析解"食物毒"相关方药物中,共收集到57首258味次、115味单方、验方。通过频次分析得出,药物类别以解药类为主,占45.74%;药物使用频率超过或等于2次的药物共计48味、占总味数的41.74%;药性主要以凉、寒为主,占比分别为:40.31%和20.54%;药味主要以苦味为主,占45.35%;药物入塔主要以风塔为主,占29.20%。"食物毒"类别以误食毒物及食物中毒为主,占35.27%和31.40%;主治范围以消化系统为主,占54.64%。主治症状主要以腹泻、呕吐为主,各占18.06%。通过频数分析与聚类分析,解"食物毒"药物可归为7类药物组合方,其中相类方"雅解沙把"符合安全性、可操作性、可获取性等临床应用推广条件。2 卵清蛋白过敏小鼠模型评价指标结果2.1 过敏症状第一次OVA灌胃激发后,"雅解沙把"低、中、高剂量组小鼠过敏症状分数较模型组均降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。第二次OVA灌胃激发后,"雅解沙把"低、中、高剂量组小鼠过敏症状分数较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。2.2腹泻症状第一次OVA灌胃激发后,"雅解沙把"低、中、高剂量组小鼠腹泻分数较模型组均降低,但只有中剂量组有显著性差异(P<0.05)。第二次OVA灌胃激发后,药物干预组小鼠腹泻分数较模型组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。2.3血清OVA-IgE水平药物干预组小鼠血清OVA-IgE水平较模型组均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。3肠道菌群结构结果3.1小鼠粪便菌群Alpha多样性及和丰富度药物干预组小鼠肠道总微生物群落丰度指标ACE、Chao1指数较模型组无差异(P>0.05),但"雅解沙把"高剂量有增加两者的趋势。同时药物干预组小鼠Shannon指数较模型组有升高趋势;而Simpson指数有下降趋势,但只有中剂量组有统计学意义(P<0.05)。3.2小鼠肠道微生态构成及分布丰度在"门"水平上,与模型组相比,药物干预组小鼠厚壁菌门细菌比例呈减少趋势,以高剂量组明显,差异有统计学意义(P<0.05);而拟杆菌门细菌比例呈增加趋势,以高剂量组明显,差异有统计学意义(P<0.05)。在"属" 水平上,与模型组相比,乳酸杆菌(Lactobacillus)属细菌呈减少趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);而Barnesiella属细菌呈增加趋势,以高剂量显著,差异有统计学意义(P<0.05)。3.3肠道微生物群落结构差别与模型组相比,药物干预组小鼠微生物群落样品在空间分布上相对独立,能明显分开。4肠黏膜通透性结果与模型组相比,药物干预组小鼠肠上皮紧密连接蛋白Occludin mRNA表达量明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);而肠上皮紧密连接蛋白Claudin3mRNA表达量无明显变化,无统计学意义(P>0.05)。5肠黏膜免疫结果与模型组相比,"雅解沙把"低、中剂量组小鼠血清IL-4浓度有升高趋势,但无统计学差异(P>0.05),而"雅解沙把"高剂量组小鼠血清IL-4浓度明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,药物干预组小鼠血清IFN-γ浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。药物干预组均有下调小鼠血清IL-4/IFN-γ比值的趋势,但只有高剂量比值显著降低,差异统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,药物干预组小鼠IL-17mRNA表达量、TGF-β1mRNA表达量、TGF-β1/IL-17比值及sIgA水平均无差异(P>0.05)。结论1 解"食物毒"方药规律以解药类药物为主;药性以凉为主,药味以苦味为主;配伍以复方为主,遵循寒热并用,调平"四塔"原则。2 傣医部分"食物毒"与食物过敏有相关性,食物过敏是最能体现"食物毒"内涵的疾病之一。"雅解沙把"是解"食物毒"代表方之一,肠道是研究的角度和途径,腹泻是"食物毒"的主要症状之一。3 "雅解沙把"通过降低过敏症状分数、腹泻分数、血清OVA-IgE水平,缓解卵清蛋白过敏小鼠症状。4 "雅解沙把"通过升高小鼠Shannon指数,降低Simpson指数,增加菌落多样性,调节失衡的肠道菌群。5 在肠道微生态的门水平上,"雅解沙把"能降低小鼠厚壁菌门细菌比例,增加拟杆菌门细菌比例,恢复失衡的肠道菌群,且以"雅解沙把"高剂量效果显著。6 在肠道微生态的属水平上,"雅解沙把"能降低小鼠乳酸杆菌属细菌比例,增加Barnesiella属细菌比例,恢复失衡的肠道菌群,且以"雅解沙把"高剂量效果显著。7 "雅解沙把"可以恢复小鼠肠道微生物群落结构差别。8 "雅解沙把"通过提高小鼠Occludin mRNA的含量,保护肠黏膜上皮的完整性,降低通透性,其对Claudin 3 mRNA的含量无影响。9 "雅解沙把"通过降低小鼠血清IL-4浓度,升高IFN-γ浓度,下调IL-4/IFN-γ比值,可对免疫细胞Th2优势所致的免疫失衡状态进行调节,恢复Th1/Th2平衡。10 "雅解沙把"对 IL-17 mRNA、TGF-β1 mRNA 表达量,TGF-β1/IL-17 比值及 sIgA水平无影响。11 "雅解沙把"治疗食物过敏具有应用前景,尤其是高剂量效果显著。