鹿茸组分对人骨髓造血细胞体外增殖影响的研究

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目的:研究从两种不同工艺加工的成品鹿茸中所提取的具有不同生物学活性的鹿茸组分,与人骨髓单个核细胞(MNC)体外共培养,观察其对细胞体外增殖的调控作用,从而探讨传统中药鹿茸对于机体造血系统的药理效应,并希望能为鹿茸加工工艺改进的评估和鹿茸相关药物的开发及其更合理的应用于临床提供实验依据。方法:1.分别采取未累及骨髓的患者5例、急性髓细胞白血病(AML)患者5例、再生障碍性贫血(AA)患者5例的肝素抗凝骨髓各5ml,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞(MNC)。2.三种骨髓分为正常骨髓组、白血病骨髓组、再生障碍性贫血骨髓组,每组再分为:(1)阴性对照组:不加鹿茸组分。(2)阳性对照组:加热炸茸-C组分。(3)试验组:加冷工艺茸-A、B、D、E组分,并且各组分为又分低-30 ug/ml、高-60 ug /ml两种浓度。各鹿茸组分来源如下:A组分:为带血梅花鹿茸上段的水提取物全成分。提取方法:带血梅花鹿茸上段低温粉碎,用去离子水渗滤,提取液经10000rpm 4°C离心30分,取上清液冻干成粉。B组分:带血梅花鹿茸上段,处理同A组分,总提取物过G200凝胶柱后,用0.2M NaCL洗脱液,冻干。C组分:热炸梅花鹿茸上段,处理同A组分。D组分:带血马鹿茸上段,处理同A组分。E组分:带血马鹿茸上段,处理同B组分。3.三种骨髓MNC分别行液体培养,72小时后进行以下实验:(1)MTT比色法测定吸光度(OD)值;(2)SP细胞免疫化学染色,测Bcl-2及突变型p53的表达率;(3)白血病骨髓MNC培养后采用流式细胞术测细胞表面分子CD34、CD13表达率。4.三种骨髓MNC分别行CFU-mix集落半固体培养,于第14天计数含有50个细胞以上的混合集落,并摄像;培养过程中通过倒置显微镜动态观察集落的生长情况。5.数据处理采用单
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