荸荠茎点霉秆枯病菌毒素的特性及病害防治技术研究

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荸荠茎点霉秆枯病是由茎点霉属病原菌(Phoma bellidis Neerg)引起的真菌病害,该病在湖北省团风县荸荠种植区大面积发生,严重危害荸荠生产。本研究在实验室前期工作的基础上,对病原菌的毒素进行了分离,电镜观察毒素对寄主细胞超微结构的影响,在调查病害田间发生动态的基础上,研究了病害的田间防治技术。主要结果如下:1、采用乙酸乙酯萃取、旋蒸浓缩的方法,从荸荠茎点霉秆枯病菌培养液中分离出粗毒素,粗毒素的最佳溶剂为20%甲醇。从24种薄层层析(TLC)展开剂中筛选出的12号展开剂(乙酸乙酯∶冰醋酸∶水=15∶1∶2)分离效果最好,采用TLC法分离毒素,可将粗毒素分离成14个组分(T1~T14),生物活性测定结果表明,Rf值为0.93、0.95的两个组分T12、T13的致病活性最强。采用高效液相色谱(HPLC)对T12、T13进行进一步分离,结果表明T12、T13的色谱图分别含8和26个波峰,生物测定T13的8个波峰对应物质的致病活性,结果表明,T13-4、T13-5的致病活性高于其他组分,在HPLC色谱图中的保留时间分别为2.65 min和2.8 min,占总毒素的含量分别为25.62%和70.72%。2、用0.02 g/ml粗毒素分别接种抗病品种(杨店荸荠)和感品种荸荠(庐山荸荠)的茎秆,在电子显微镜下观察接种后3、6、12、24 h后接种点寄主细胞超微结构变化,结果表明,抗病品种荸荠经毒素处理3 h后,细胞超微结构正常,6 h后,线粒体、叶绿体和细胞核中出现气泡,12 h后,发生质壁分离,细胞膜变形,叶绿体片层结构被破坏,24 h后,细胞死亡。感病品种荸荠经毒素处理3 h后,质壁分离,细胞质膜内陷,6 h后,叶绿体片层结构解体,12 h后,茎秆细胞膜结构解体,细胞死亡。毒素对抗、感品种细胞的破坏在时间上和程度上存在明显差异。3、2014年~2015年荸荠茎点霉秆枯病田间发病动态调查结果表明,8月上旬~9月上旬为发病初期;9月下旬病害快速增长,10月中、下旬为病害高峰期,2014年和2015年病情指数分别为6.11、18.01。采用DPS软件分析两年的气象因素和病情指数的相关性,结果表明:该病的病情指数与日均温度呈显著负相关。4、室内采用荸荠茎点霉秆枯病菌孢子和毒素接种离体荸荠茎秆的方法,评价34个荸荠品种的抗病性,结果表明,庐山荸荠、韶关马坝荠、宝应荸荠、蕲州荸荠、三江-98和潮州荸荠为感病品种,益阳荸荠、桂林-2、江西家荠、湘潭荸荠、杨店荸荠为抗病品种。2014年~2015年对不同荸荠品种田间抗病性的鉴定结果表明,34个供试品种中,新滘-2表现为感病,连江大荠、安徽荸荠表现为抗病。湘潭荸荠、杨店荸荠和桂林-2三个品种在田间和在室内鉴定试验中均表现出较好的抗性,可在生产中推广种植。5、2014年,选用3种杀菌剂进行了病害防治试验,在最后一次施药后10天和20天调查发病情况,计算病指防效,结果表明:10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500倍液病指防效分别为98.72%和94.79%,高于70%代森锰锌可湿性粉剂700倍液和25%多菌灵可湿性粉剂500倍液。
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