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科研工作来源：广东省中医药局资助项目(307012)。目的和意义：探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的分子机制,为鳖甲煎丸应用于临床抗肝纤维化提供更加充分的理论依据,为开发抗肝纤维化的中药奠定坚实的理论基础。研究方法：以复合因素诱导的肝纤维化模型大鼠为研究对象,观察鳖甲煎丸对模型大鼠的症状、体征；肝组织形态学；血清肝功能、HA、PcⅢ;大鼠肝组织TGF-β1及其信号转导通路的影响。60只Wistar大鼠随机分为5组,即正常对照组(A组)、模型组(B组)、秋水仙碱组(C组)、鳖甲煎丸大剂量组(D组)、鳖甲煎丸中剂量组(E组)。除A组外,其余大鼠于实验第1d每只皮下注射40%(体积分数)CCl4花生油0.5ml·100g-1；以后每3日注射0.3m1·l00g。各组均以79.5%的单纯玉米粉加20%猪油和0.5%的胆固醇混合饲料喂养,并以15%乙醇为饮料。A组注射等量花生油,进食普通饲料并自由饮水。各组在造模第2天每日灌胃给相应药物,C组每日灌服秋水仙碱0.011mg·100g-1, D、E组分别每日灌服鳖甲煎丸2.2g·100g-1、1.1g·100g-1,B组及A组灌以等量蒸馏水作对照。第6周末,处死动物,取血和肝组织备用。一部分肝组织固定于10%中性福尔马林溶液。肝组织常规脱水,石蜡包埋,切片厚5μm,做光镜观察和免疫组化用。根据试剂盒说明书,分别用赖氏法和比色法测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性；放免法测定血清HA、PcⅢ水平。光学显微镜下观察肝组织病理学变化并进行肝纤维化分级；免疫组织化学技术检测TGF-β1、CTGF等表达。统计学处理：实验结果计量资料用均数±标准差表示,组间比较用one-way ANOVA,方差齐性时,采用LSD方法进行组间多重比较,方差不齐时,采用DunnettT3方法进行组间多重比较；等级资料采用Kruskal-Wallis H非参数检验。用统计软件SPSS13.0进行分析,以P<O.05定为差异有统计学意义。研究内容和过程：1.观察鳖甲煎丸对模型大鼠的症状、体征及肝组织形态学的影响模型组大鼠精神不振、消瘦、厌食,饮水减少,大便稀溏,小便色黄而少；肝脏表面较正常组欠光滑,颜色浅,边缘钝,质地硬,部分标本表面凹凸不平,呈小结节状。各药物组大鼠精神状态、毛色泽、饮食饮水、排便等一般情况均明显改善,以鳖甲煎丸各组改善情况为佳。在改善饮水症状上,鳖甲煎丸大、中剂量组作用与秋水仙碱组比较有统计学差异(P<0.05),在改善进食和增加体重方面,鳖甲煎丸大剂量组作用与秋水仙碱组比较有统计学差异(P<0.05)。光镜观察显示：模型组正常肝小叶结构破坏,肝索排列紊乱,可见肝细胞点状坏死,肝细胞空泡变性散在分布,间质增生明显,胶原纤维构成的纤维间隔形成,有完整的假小叶形成。各药物组肝小叶结构明显改善,胶原纤维间隔较少,肝细胞坏死、炎性细胞浸润少见,但极少数大鼠仍有不完全性假小叶。各组大鼠肝纤维化分级比较有统计学意义(P<0.05)。2.鳖甲煎丸对模型大鼠血清肝功能及HA、PcⅢ的影响模型组血清ALT、AST、AST/ALT比值、HA、PcⅢ水平均较正常组显著升高(P<0.05)；与模型组比较,鳖甲煎丸大、中剂量组ALT、AST活性、HA、PcⅢ水平显著下降(P<0.05), AST/ALT比值亦显著降低(P<0.05)；鳖甲煎丸大、中剂量组降低ALT活性作用显著优于秋水仙碱(P<0.05)；大剂量鳖甲煎丸组降低AST活性作用显著优于秋水仙碱(P<0.05)；各药物组AST/ALT比值及HA、PcⅢ水平差异无显著性意义(P>0.05)。3.鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1的影响TGF-β1的表达：正常组肝细胞内几乎无表达,肝窦间隙、汇管区基质及间质细胞内有极少量表达。模型组肝内TGF-β1表达明显增强,主要见于间质细.胞、炎性细胞以及损伤的肝细胞,纤维间隔有弱阳性表达。各药物组阳性染色程度较模型组明显减轻,主要表达集中在间质细胞和炎性细胞胞质内。统计学显示：模型组肝组织TGF-β1的表达较正常组显著增多(P<0.05)。鳖甲煎丸大、中剂量TGF-β1表达显著下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其作用与秋水仙碱比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠肝组织CTGF的影响正常组肝组织几乎未见CTGF的表达,模型组肝组织CTGF表达明显增强,数目增多,呈棕黄色胞浆型分布。主要见于汇管区、纤维间隔中。以沿间隔分布的梭形间质细胞表达为主,肝细胞未见阳性信号。各药物组阳性染色程度较模型组明显减轻,在纤维间隔内间质细胞和炎细胞胞浆阳性染色程度减轻,阳性细胞数目减少。模型组CTGF表达明显增多,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；鳖甲煎丸大、中剂量CTGF表达明显减少,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；鳖甲煎丸大剂量与秋水仙碱比较差异无统计学意义(P>0.05),但鳖甲煎丸中剂量组降低CTGF作用弱于秋水仙碱组(P<0.05)。结论：鳖甲煎丸具有较好的抗模型大鼠肝纤维化作用,其作用机制为：1.鳖甲煎丸可以有效的改善肝纤维化模型大鼠的一般情况：如改善模型鼠的精神状况,增加体重,改善食欲和饮水等症状,提高大鼠生存质量；2.鳖甲煎丸明显降低ALT、AST、HA、PcⅢ含量,提示鳖甲煎丸能有效减轻炎症反应,保护肝细胞,降低血清中纤维化指标含量,从而抑制早期肝纤维化的启动；3.光镜形态学观察表明鳖甲煎丸能明显改善肝细胞损伤结构,减轻纤维组织增生；4.鳖甲煎丸能明显抑制肝组织TGF-β1的表达,提示鳖甲煎丸具有抑制TGF-β1信号转导作用；5.鳖甲煎丸能明显抑制肝组织CTGF的表达,CTGF是鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用靶点之一。综上所述,鳖甲煎丸具有综合的抗肝纤维化的药理作用,其作用机制为多途径、多靶点。抑制TGF-β1及其信号转导、抑制CTGF的表达可能是其抗肝纤维化的分子机制之一。而这一机制与鳖甲煎丸抑制炎症反应,保护肝细胞,降低血清中纤维化指标含量,减少细胞因子所产生的细胞因子瀑布效应,从而抑制肝纤维化的启动密切相关。