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目的:确定通窍活血汤对脑缺血损伤的保护作用,初步阐明通窍活血汤对脑缺血损伤保护作用的可能机制,为临床通窍活血汤治疗缺血性脑卒中提供实验数据支持。方法:1.通窍活血汤对脑缺血损伤的保护作用(1)线栓法阻塞大鼠大脑中动脉(MCAO),制备大鼠脑缺血损伤模型。(2)将造模成功的大鼠随机分为模型(Model)组、通窍活血汤全方组和活血通阳组、通窍通阳组、活血通窍组,假手术组(Sham)只进行手术操作,不插线,每组14只。每日一次进行药物灌胃,其中Sham组和Model组给予蒸馏水,连续给药7天。(3)采用Zea-Longa法进行神经行为学评分。(4)采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法进行脑梗死体积的测定。(5)采用干湿重法进行脑含水量的测定。(6)采用苏木精-伊红(HE)染色法进行脑组织形态学的测定。2.通窍活血汤对脑缺血损伤保护作用的机制(1)采用全自动血液流变仪进行低中高(1s-1,2s-1,50s-1,100s-1)切变率下的全血粘度(WBV)、血浆粘度(PV)、红细胞变形指数(EDI)、红细胞刚性指数(ERI)、红细胞聚集指数(EAI)、红细胞压积(HCT)的检测。(2)采用免疫组化法进行脑组织中CD34,Neu N表达情况的检测。(3)采用酶联免疫法进行血清中缺氧诱导因子1α(HIF-1α),血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平的检测。(4)采用Western-blot法进行缺氧诱导因子1α(HIF-1α),血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平的检测。结果:1.通窍活血汤对脑缺血损伤的保护作用(1)线栓法阻塞大鼠大脑中动脉后,出现神经功能损伤,表明造模成功。(2)神经功能评分结果显示:造模后大鼠神经功能评分显著升高;给药后相较于模型组,通窍活血汤全方组、活血通阳拆方组、通窍通阳拆方组的脑缺血大鼠神经功能评分降低,通窍通阳拆方组没有明显变化,其中通窍活血汤组神经功能评分低于活血通阳组和通窍通阳组。(3)TTC染色结果显示:造模后大鼠脑梗死体积显著增加;给药后相较于模型组,通窍活血汤全方组及拆方组脑缺血大鼠脑梗死体积显著减少,其中通窍活血汤全方组梗死体积明显低于各拆方组。(4)脑含水量结果显示:造模后大鼠脑含水量显著升高,给药后相较于模型组,通窍活血汤全方组及拆方组脑缺血大鼠脑含水量降低,而通窍活血汤全方组和拆方组没有明显差异。(5)HE染色结果显示:假手术组大鼠脑组织神经细胞胞质丰富,核大而圆,无组织病理学改变;造模后的脑缺血大鼠脑组织可见神经细胞胞核固缩深染,神经细胞气球样变,核居中,胞质空泡化,间质中可见不规则的微小空洞;给药后,相较于模型组,各给药组的脑损伤情况得到改善,正常完整的神经细胞数量明显增多,排列有序,神经细胞胞核固缩情况减少。2.通窍活血汤对脑缺血损伤保护作用的机制(1)血液流变学全血黏度和血浆黏度结果显示:造模后大鼠低、中、高切全血黏度和血浆黏度均显著升高;给药后相较于模型组,通窍活血汤全方组的低、中、高切全血黏度和血浆黏度降低,活血通阳拆方组、活血通窍拆方组的低、中、高切全血黏度和血浆黏度降低,通窍通阳拆方组的全血黏度和血浆黏度没有明显差异,且在50s-1切变率下,在50 s-1切变率下,通窍活血汤组的全血黏度低于活血通阳、活血通窍拆方组。血液流变学红细胞功能结果显示:造模后大鼠红细胞变形指数降低,红细胞聚集指数、红细胞刚性、红细胞压积均有所升高;给药后相较于模型组,通窍活血汤全方组、活血通阳拆方组、活血通窍拆方组的变形指数升高,红细胞聚集指数、红细胞刚性,红细胞压积降低,通窍通阳拆方组的红细胞功能没有明显差异,其中通窍活血汤组的红细胞刚性低于活血通阳组,通窍活血汤组的红细胞压积高于活血通阳组和活血通窍组。(2)免疫组化结果显示:造模后,大鼠的脑微血管密度显著升高;给药后相较于模型组,各给药组脑缺血大鼠脑微血管密度显著升高,且通窍活血汤组的脑微血管密度高于各拆方组。造模后大鼠的脑组织中Neu N阳性表达显著减少;给药后相较于模型组,各给药组脑缺血大鼠的Neu N阳性表达显著升高,且通窍活血汤组高于各拆方组。(3)Elisa结果显示:造模后大鼠血清中HIF-1α和VEGF的表达显著升高;给药后相较于模型组,各给药组脑缺血大鼠血清的HIF-1α、VEGF的表达显著升高,且通窍活血汤组的HIF-1α、VEGF的表达高于各拆方组。(4)Western Blot结果显示:造模后大鼠HIF-1α和VEGF的蛋白表达显著升高;给药后相较于模型组,各给药组脑缺血大鼠HIF-1α和VEGF的蛋白表达显著升高,其中通窍活血汤组的HIF-1α、VEGF的蛋白表达高于各拆方组。结论:1.通窍活血汤全方组及其拆方组能够改善神经功能损伤,降低脑含水量,减少脑梗死体积,改善神经细胞损伤,且全方组优于各拆方组。2.通窍活血汤全方组、活血通阳拆方组、活血通窍拆方组能够改善脑缺血大鼠的血液流变学,降低脑缺血大鼠血液的全血黏度和血浆黏度,改善红细胞功能,且全方组优于拆方组,方中对血液流变学的改善起到重要作用的为活血化瘀药。3.通窍活血汤全方组及其拆方组均能在一定程度上增强促进血管新生的作用;通窍活血汤全方组及拆方组促进血管新生的作用机制与增强HIF-1α、VEGF蛋白的表达有关。