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目的:研究心肌营养素1(CT1)对人脐血间充质干细胞(h UCB-MSCs)向神经方向诱导及存活的作用,并探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在此过程中的机制。方法:(1)通过密度梯度离心结合贴壁筛选法从人脐血中分离、培养、纯化间充质干细胞(MSCs),流式细胞术鉴定;(2)采用不同感染复数(50,100,200 PFU/cell)的Adv-CT1-EGFP转染h UCB-MSCs,摸索最佳转染复数;(3)选用感染复数100PFU/cell转染h UCB-MSC后,用谷氨酸、无血清高糖及维甲酸为神经诱导培养基(NIM),利用免疫荧光技术检测诱导后6h及4d神经蛋白巢蛋白(nestin)及β-微管蛋白Ⅲ(βⅢ-tubulin)表达;(4)CCK8及TUNEL技术检测神经诱导分化后6h及4d细胞存活及凋亡率;(5)加或不加PI3K/Akt特异性阻断剂LY294002,用Western blot法分别检测神经诱导分化后细胞Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白Bax、Bak、Bcl-2、caspase3及cleved-caspase3表达。结果:(1)密度梯度结合贴壁筛选法可培养分离出高表达CD29、CD44、CD105,不表达CD34的h UCB-MSCs;(2)感染复数为100PFU/cell转染效率最佳(81.86±2.82%);(3)诱导分化6h细胞呈类神经样改变(胞质向胞核皱缩);NIM+CT1组nestin阳性表达率>单纯NIM组(88.57%±2.81 vs.79.31%±2.60,P<0.05);诱导分化后4d细胞呈典型神经样改变(胞质伸出细长突起交织成网状),NIM+CT1组βⅢ-tubulin阳性表达率>单纯NIM组(55.44±2.09%vs.40.93±2.55%,P<0.05)。(4)CCK8测得NIM+CT1组神经诱导分化后细胞6h、4d存活率均高于单纯NIM组(91.00±1.82%vs.82.63±2.03%;81.09±4.02%vs.55.70±12.40%,P<0.05),TUNEL测得NIM+CT1组神经诱导分化后6h、4d细胞凋亡率均低于单纯NIM组(20.60±2.55%vs.35.41±4.11%;26.81±2.28%vs.57.73±2.23%,P<0.05);(5)Western blot检测发现NIM+CT1组较单纯NIM组高表达p-Akt、Bcl-2,低表达Bax、Bak、cleved-caspase3,差异具有统计学意义(P<0.05),这一作用可被PI3K/Akt信号通路特异性阻断剂(LY294002)阻滞。结论:(1)无血清维甲酸培养基可有效诱导h UCB-MSCs向神经细胞分化,CT-1可促进分化作用;(2)CT1可提高h UCB-MSCs神经诱导分化后细胞存活率,降低细胞凋亡率;(3)PI3K/Akt信号通路参与CT1促h UCB-MSCs神经诱导分化及存活作用。