【摘 要】
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欧美杨溃疡病病原细菌为Lonsdalea quercina subsp.populi,由其引起的病害对欧美杨产业造成了非常严重的影响,目前尚无有效的防治措施。为进一步阐明与病原菌致病过程相关的因
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欧美杨溃疡病病原细菌为Lonsdalea quercina subsp.populi,由其引起的病害对欧美杨产业造成了非常严重的影响,目前尚无有效的防治措施。为进一步阐明与病原菌致病过程相关的因素,为病害控制提供理论依据,本研究首先对病菌的培养条件做了优化,之后构建了Ⅲ型分泌系统结构基因hrcJ和hrp基因簇调控基因hrpX与hrpY的插入突变体,进行了生物膜、游动性、致病性和过敏性等生物测定,研究了它们的功能。研究得出以下主要结果: L.quercina N-5-1菌株体外培养条件研究表明,其最适合生长温度为30-34℃,最适pH为6-7。 以L.quercina N-5-1菌株为材料,利用同源重组原理构建L.quercina N-5-1菌株的基因突变体。获得了编码Ⅲ型分泌系统结构基因hrcJ的插入突变体,并通过PCR和Southern杂交确认。生物学特性测试表明:hrcJ基因的插入突变体在一年生107杨杨苗干上的致病能力显著下降,野生型菌株N-5-1、插入突变体菌株△hrc和互补载体菌株HBhrcJ的病情指数分别为84.4、31.1和66.7,并且丧失了在本氏烟草上的HR激发能力,功能互补突变体部分恢复至野生表型;生长能力测定显示,野生型菌株N-5-1、插入突变体△hrcJ和互补载体HBhrcJ生长曲线无明显差异,在液体LB培养基中均可正常生长;通过结晶紫染色后,在培养△hrcJ、HBhrcJ、野生菌株N-5-1的试管壁上均可以观察到紫色环状的生物膜形成,三种菌株的OD570值相近;游动性测试表明,hrcJ因突变体的运动能力比野生菌株下降了21%。 以同样方法获得了L.quercina N-5-1菌株hrpX和hrpY基因的插入突变体,生物学实验测试表明hrpX和hrpY基因的插入突变体的生长速度与野生型相比没有差异,但其运动性和生物膜形成能力下降。致病性测定表明,△hrpX和△hrpY与菌株L.quercinaN-5-1相比,病情指数分别下降52.1%和75.5%,即hrp基因簇调控基因hrpX和hrpY与菌株L.quercina N-5-1的致病性密切相关。hrpX和hrpY基因插入突变体的构建,为了解hrp基因簇基因的调控功能奠定了基础。
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