目的:Treg(CD4+CD25+T细胞)为机体内重要负性免疫调节细胞，脓毒症时Treg功能增强，可能与脾脏内效应性T细胞的大量凋亡有关，在脓毒症免疫紊乱发生中具有重要作用。资料表明，转化生长因子β1(TGF-β1)在调节效应T细胞的分化、增殖和凋亡中具有直接作用，本研究旨在通过检测脓毒症小鼠脾脏Treg功能状态以及体外共培养时对Teff(CD4+CD25-T细胞)凋亡的影响，分析TGF-β1在介导Treg促进Teff凋亡中的作用及相关分子机制，为脓毒症的免疫调理治疗提供新的理论依据和潜在靶标。　　 方法:建立稳定的小鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型，分别于术后24小时(h)、48h断颈处死小鼠，无菌留取脾脏，免疫磁珠法分选CD4+CD25-T细胞(Teff)与Treg。流式细胞术检测Treg表面TGF-β1、CTLA-4及胞内Foxp3的表达水平;RT-PCR法检测Treg细胞内TGF-β1 mRNA水平。另外，用抗-CD3抗体(5μg/ml)和抗-CD28抗体(5μg/ml)预孵育96孔培养板1h后，将CFSE标记的-Teff与Treg按照2∶1的比例进行混合培养(细胞浓度为1×106/ml):1.采用CCK-8和AnnexinV-PE法检测共培养68h后Teff的增殖和凋亡，分析脓毒症时Treg的功能变化，及其对Teff增殖和凋亡的影响;2.培养液中加入抗TGF-β抗体，应用CCK-8和Annexin V-PE法检测共培养68h后Teff的增殖和凋亡，并采用Western blot法检测共培养后Teff细胞内Smad2/P-Smad2及Smad3/P-Smad3的蛋白水平，分析TGF-β1在脓毒症时Treg诱导Teff凋亡中的作用;3.细胞经DIOC6(3)染色后，流式细胞术检测共培养后Teff线粒体膜电位的变化，然后采用Western blot技术检测Teff细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2与Bim的变化，并用化学比色法分析caspase-3，8，9的相对活性。分析脓毒症时Treg通过膜表面TGF-β1促进Teff凋亡的机制。　　 结果:　　 1.脓毒症时Treg表型的变化及对Teff增殖和凋亡的影响:(1)建立了稳定的CLP模型，术后Sham组（假伤组）小鼠无死亡，72h存活率为100％。CLP组术后72h存活率为50％，且均具有脓毒症的表现。(2)与sham组相比，CLP-24h组、CLP-48h组Treg表面的TGF-β1、CTLA-4及胞内的Foxp3表达均明显增强。(3)与两CLP组Treg共培养使得Teff的增殖率与凋亡率明显升高。　　 2.TGF-β1是脓毒症中Treg促进Teff凋亡机制的重要信号分子:(1)与sham组相比，CLP-24h组、CLP-48h组Treg细胞内TGF-β1基因水平均升高。(2)在Treg∶Teff共培养体系中加入抗TGF-β抗体(25μg/ml)后，使得Teff的增殖抑制率与凋亡率均降低。(3)相对于sham组Treg，与CLP-24h组、CLP-48h组Treg共培养使得培养上清中促炎因子(IL-2、IFN-γ)分泌降低，而抑炎因子(TGF-β1、IL-4、IL-10)升高。(4) Smad2、Smad3蛋白表达量在各组之间未见统计学差异;相对于sham组，与CLP-24h组、CLP-48h组Treg共培养促进Teff内P-Smad2、P-Smad3蛋白表达量增加;与未加抗TGF-β抗体比较，加入抗体之后P-Smad2、P-Smad3蛋白表达量降低。　　 3.共培养后Teff细胞线粒体膜电位、Bcl-2及Bim蛋白表达量、caspase-3，8，9的相对活性的变化:(1)相对于sham组Treg，与CLP-24h组、CLP-48h组Treg共培养使得Teff线粒体膜电位均降低，Bcl-2蛋白表达量下降、Bim蛋白表达量升高，caspase-3，8，9的相对活性均升高。(2)与相应组别未加TGF-β抗体的培养条件相比，Teff∶Treg共培养体系中加入TGF-β抗体之后，使得Teff的线粒体膜电位升高，Bcl-2蛋白表达量升高、Bim蛋白表达量降低，caspase-3，8，9的活性均有下降。　　 结论:　　 1.脓毒症时Treg细胞发生活化，其表面的TGF-β1、CTLA-4及胞内Foxp3表达增加;促Teff凋亡的能力增强。　　 2.脓毒症诱导Treg细胞内及膜表面TGF-β1表达上调，TGF-β1/Smads是Treg促进Teff凋亡重要信号通路。　　 3.脓毒症时Treg通过表面的TGF-β1促进Teff经由线粒体通路发生凋亡。