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目的观察Wnt2蛋白在胰腺癌组织中的表达状况及其对胰腺癌细胞增殖迁移侵袭等生物学行为的影响;初步探讨Wnt2蛋白影响侵袭转移的途径;探讨Wnt2蛋白在胰腺癌星形细胞对胰腺癌细胞影响过程中发挥的作用。方法1.胰腺癌组织病理Wnt2蛋白免疫组化染色,分析Wnt2蛋白在胰腺癌肿瘤组织与癌旁组织中表达的差异;并结合临床病理参数分析Wnt2与临床病理参数之间的关系;对病例资料进行随访观察,根据不同Wnt2蛋白表达状况作生存分析。2.构建Wnt2过表达质粒和干扰RNA、应用Wnt2重组蛋白,观察不同Wnt2蛋白表达水平的胰腺癌细胞株的生物学行为。3.利用荧光实时定量PCR技术和Western Blot方法检测Wnt2重组蛋白培养及干扰与过表达Wnt2后胰腺癌细胞EMT关键基因的m RNA和蛋白水平的表达;4.检测Wnt2蛋白在胰腺癌星形细胞及其上清中的表达情况,检测星形细胞培养上清对胰腺癌细胞功能的影响。结果1.通过对86例胰腺癌组织病理切片的Wnt2蛋白免疫组化染色发现,55例(63.5%)病理切片中胰腺癌细胞Wnt2蛋白表达阳性;77例(89.5%)间质细胞Wnt2表达阳性;Logistic回归分析显示:胰腺癌间质细胞Wnt2蛋白表达与生存时间及无病生存期(DFS)相关(P=0.002、P=0.007),生存分析显示免疫组化间质细胞染色评分大于10分的患者生存期与评分小于10分的患者相比有显著性差异(P=0.019)。2.生物学行为观察结果显示:与对照组相比,胰腺癌细胞株过表达组、应用Wnt2重组蛋白组胰腺癌细胞增殖速度均加快(P<0.05);而干扰组的细胞增殖速度受抑制(P<0.05);应用Wnt2重组蛋白组胰腺癌细胞迁移(P<0.05)及侵袭能力增强(P<0.05)。3.胰腺癌细胞EMT关键基因的m RNA的表达结果:RT-PCR结果显示Wnt2重组蛋白培养CFPAC-1和PANC-1细胞6小时后,Wnt2重组蛋白培养组的Vimentin基因相对表达量分别是对照组的2.06倍(P<0.05)和1.96倍(P<0.05);E-cadherin基因相对表达量分别是对照组的0.47倍(P>0.05)及0.33倍(P<0.05);PANC-1细胞干扰及过表达组Vimentin、E-Cadherin基因相对表达量与对照组之间无显著性差异。胰腺癌细胞EMT关键基因的蛋白表达水平:Western Blot结果显示CFPAC-1和PANC-1细胞经Wnt2重组蛋白培养6小时后,Vimentin蛋白表达水平增加;E-cadherin只在Wnt2重组蛋白培养的CFPAC-1细胞中表达水平降低。PANC-1细胞干扰Wnt2组,Vimentin蛋白表达水平较对照组降低,E-cadherin蛋白表达水平升高;PANC-1细胞过表达Wnt2组,E-Cadherin、Vimentin蛋白表达水平均降低。4.激活的星形细胞及其培养液中可见Wnt2蛋白,星形细胞培养液培养胰腺癌细胞增殖速度加快(P<0.05);细胞迁移(P<0.05)及侵袭能力增强(P<0.05);细胞核内β-catenin增多。结论1.Wnt2蛋白在胰腺癌间质细胞表达阳性与预后相关;患者间质染色评分越高,生存期越短。2.PANC-1和CFPAC-1胰腺癌细胞株过表达Wnt2、Wnt2重组蛋白培养均能使细胞增殖能力增加;反之,降低Wnt2的表达则会抑制细胞增殖;Wnt2重组蛋白培养可增强胰腺癌细胞迁移和侵袭能力;但干扰及过表达Wnt2对细胞的迁移和侵袭能力却没有影响。3.Wnt2重组蛋白引起了Vimentin蛋白和mRNA表达水平的上调,E-cadherin蛋白和m RNA表达水平的下调,显示Wnt2蛋白可诱导了细胞发生EMT,从而使细胞侵袭迁移能力增加。4.胰腺癌星形细胞及培养基中Wnt2表达阳性,胰腺癌细胞经星形细胞培养基培养后,经典的Wnt信号通路被激活,细胞的增殖及迁徙及侵袭能力增强。