泰山梧桐花多糖对雏鸡的免疫增强作用研究

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近年来,家禽养殖业飞速发展,但免疫抑制性疾病却流行严重,使疾病多发难控,导致对疫苗和抗生素的依赖加强,与此同时,疫苗的免疫效力减弱、抗生素滥用使得病原的耐药性增强等种种弊端也逐渐暴露出来,多种新型绿色免疫增强剂和免疫佐剂应运而生。植物多糖由于材料来源广泛、价格低廉、功效明显,并在解决药物残留和控制疫病方面有明显优势,成为新型免疫增强剂的首选。多糖是一种大分子物质,由多个单糖缩合失水而成,结构十分复杂、种属特异性强。多糖已被证实具有抗氧化、抗肿瘤、抗粘附、降低血糖等医药功效,但其最引人瞩目的还是其免疫调节的作用,这也是近年来关于多糖研究的热点。到目前为止,许多植物多糖已被证明具有免疫增强作用。梧桐花,为马鞭草科植物臭梧桐的花,据《本草纲目拾遗》记载梧桐花有祛风、降压、止痢等功效,具有较高的药用价值。目前我国梧桐花的种植逐渐形成规模,梧桐花的药用价值受到广泛关注,并取得了丰富的研究成果,但是国内对于梧桐花的研究仅限于对其成分的提取、分析和人类保健品的研究与开发,而对梧桐花多糖应用于畜禽疫病防治方面的研究则鲜有报道。本研究室所在的泰山地区得天独厚的自然环境和地理特征为梧桐树的规模种植提供了便利,因此,本课题组以泰山梧桐花为研究对象,所用原料均是课题组成员在初春时采自泰山地区的新鲜梧桐花,风干破碎后用水提醇沉法提取了粗多糖,同时经过抽提脂肪、去除蛋白质等步骤去除了多糖中的杂质,保证了粗多糖较高的纯度。试验中选取由SPF胚孵化的健康雏鸡为动物模型,探讨梧桐花多糖对雏鸡的免疫增强作用。旨在将其研制成新型植物免疫增强剂,为健康畜牧业的发展做贡献。本研究共分为以下二个部分:第一部分泰山梧桐花多糖对雏鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响研究为探究泰山梧桐花多糖(TFSFPS)对雏鸡脾脏淋巴细胞体内外增殖的影响,本研究分两部分进行试验:第一部分,分别向两组雏鸡注射3种浓度(400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL)的TFSFPS,同时设置泰山松花粉对照组(TPPPS,浓度为400μg/mL)和空白对照组,在第7d、14d、21d时制备脾淋巴细胞,用PI染色法测定雏鸡脾脏淋巴细胞转化率;第二部分,将三种浓度的TFSFPS分别加入到体外分离培养的鸡脾脏淋巴细胞中,同样设置TPPPS对照组,培养48h后,用PI染色法测定鸡脾脏淋巴细胞转化率。结果表明,在脾淋巴细胞体内增殖试验中,三种浓度TFSFPS作用下的脾脏淋巴细胞转化率均显著高于空白对照组,但小于TPPPS对照组对脾脏淋巴细胞增殖的刺激作用;在脾淋巴细胞体外增殖试验中,两种多糖组的脾脏淋巴细胞转化率同样显著高于对照组,TPPPS组的脾脏淋巴细胞转化率均高于同浓度的TFSFPS组。由此表明, TFSFPS对鸡脾脏淋巴细胞的体内、外增殖均有刺激作用,但是刺激作用弱于TPPPS。本试验结果对于TFSFPS开发成新型免疫增强剂提供了理论依据。第二部分泰山梧桐花多糖对雏鸡免疫增强作用的研究为研究泰山梧桐花多糖对雏鸡免疫增强作用及其对免疫抑制雏鸡的免疫调理作用,本课题组选取由1日龄SPF胚孵化的健康雏鸡225只,随机分为9个组:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为TFSFPS组,分别于颈部皮下注射TFSFPS400mg/mL、200mg/mL、100mg/mL;Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组为TFSFPS+CTX组,各组在注射三种浓度的多糖的同时注射40mg/kg CTX;Ⅶ组为CTX对照组,只注射40mg/kg CTX,Ⅷ组为TPPPS对照组,注射400mg/mLTPPPS, Ⅸ组为空白对照组,注射等量灭菌生理盐水。所有雏鸡免疫新城疫灭活苗,分别在疫苗免疫后第3d、7d、14d、21d、28d、35d、42d采样,检测免疫器官指数、血清抗体水平、白细胞数、淋巴细胞比率、外周血T淋巴细胞转化率、IL-2、IFN-γ和小肠SIgA等指标。结果显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅷ组各免疫指标均显著高于Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ组(P<0.05),表明TFSFPS对雏鸡有免疫增强作用,并能一定程度上解除免疫抑制;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅷ四组间,Ⅷ组均高于其它三个组,但是与Ⅰ组相比差异不显著(P<0.05)。
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