【摘 要】
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目的通过构建稳定过表达双链RNA结合蛋白2(TRBP2)基因的细胞株,探讨TRBP2对人肺腺癌细胞A549体外增殖、侵袭、迁移能力的影响及可能机制。方法1.构建TRBP2慢病毒过表达载体,
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目的通过构建稳定过表达双链RNA结合蛋白2(TRBP2)基因的细胞株,探讨TRBP2对人肺腺癌细胞A549体外增殖、侵袭、迁移能力的影响及可能机制。方法1.构建TRBP2慢病毒过表达载体,以不同感染复数(MOI)感染A549细胞,根据绿色荧光强度选择最适MOI值。筛选并获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞株。2.实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测TRBP2、MMP-2及PKR mRNA表达3.免疫蛋白印记(Western blot)法检测TRBP2、MMP-2、p-PKR及PKR蛋白的表达。4.采用MTT法、平板克隆实验检测各组细胞增殖能力。5.采用transwell小室,粘附实验检测各组细胞迁移、侵袭及同、异种细胞间粘附能力。结果成功构建了TRBP2基因过表达的A549细胞系。过表达TRBP2慢病毒感染组细胞体外侵袭、迁移能力明显增强(P<0.05),同种细胞间黏附力减弱(P<0.05)而异种细胞间粘附能力明显增强(P<0.05)；增殖和克隆形成能力增强(P<0.05); MMP-2、TRBP2蛋白及mRNA表达量升高(P<0.05), PKR蛋白及mRNA表达量无差异(P>0.05)、p-PKR蛋白表达量降低(P<0.05)。结论该研究表明,过表达TRBP2基因可能通过促进MMP2的表达同时抑制PKR磷酸化,而促进肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭。
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