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目的: [1]预测并筛选富含B细胞表位和CTL表位的HCMV UL138片段。 [2]构建富含B细胞表位及CTL表位片段的毕赤酵母真核表达质粒pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13815-27和pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13896-138。 [3]利用毕赤酵母表达系统表达HPV16 L1/UL13815-27、HPV16 L1/UL138969-138蛋白，并采用肝素亲和层析法纯化嵌合VLPs并加以鉴定。 [4] HPV16 L1-UL138嵌合VLPs免疫BALB/c小鼠，通过ELISA和CTL活性检测实验分析其诱导的特异性抗体水平及CTL活性。 方法: [1]自NCBI网站获得HCMV UL138基因全序列，运用生物信息学方法预测UL138的B细胞表位和CTL9肽表位，筛选富含B细胞和CTL表位的UL13896-138及HCMV UL13815-27片段。 [2]在不改变氨基酸密码的前提下，采用酵母偏爱的同义密码子替代野生型HPV16 L1基因序列中的酵母稀有密码子，全基因合成。选择富含CTL表位的UL13815-27及富含B细胞表位的UL13896-138序列，分别设计互补的核苷酸链，退火后即可获得UL13815-27及UL13896-138序列，并分别与密码子优化的HPV16 L1基因连接，克隆至pPIC3.5K真核表达载体中构建pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13815-27和pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13896-138嵌合重组质粒，通过酶切、PCR和测序鉴定。 [3]嵌合重组质粒经BglⅡ酶切线性化后，电转化至GS115菌株中，筛选阳性转化子。阳性菌株经甲醇诱导后，以HPV16 L1单克隆抗体检测目的蛋白表达;采用肝素亲和层析法纯化嵌合VLPs并在透射电镜下观察其形态。 [4]用纯化的HPV16 L1/UL13815-27、 HPV16 L1/UL13896-138嵌合VLPs免疫BALB/c小鼠，设置HPV16 L1及PBS作为对照组，每组6只小鼠，间隔2周免疫，共免疫3次。免疫前及每次免疫后1周断尾取血并分离血清，第3次免疫后1周，眼眶采血，处死小鼠后，分离脾细胞，进行LDH法检测诱导的CTL反应。小鼠血清HPV16 L1和UL138特异性抗体采用ELISA检测。 结果: [1]运用生物信息学方法预测出的UL138的HLA-A*0201限制性CTL9肽表位为:UL13815-23(VMLVLIVAI)、UL13816-24(MLVLWAIL)及UL13819-27(LIVAILCYL);优势B细胞表位是:UL13871-87(AVRRESDRRYRFSERPD)、UL13894-108(EEVSSQCSYASSRIT)、UL138104-123(SSRITDRRAGSS SSSSVHVA)、UL138123-138(ANQRNSVPPPDMAVTA)、UL138147-157(KPVTGSATQFT)。 [2]优化、合成了HPV16 L1基因并将其克隆到了真核表达载体pPIC3.5K上，成功构建了pPIC3.5K/HPV16 L1重组质粒。获得上述表位的基因序列合成后将其与优化好的HPV16 L1基因连接并克隆到了pPIC3.5K表达载体上，PCR、酶切和测序分析均表明成功构建了pPIC3.5K/HPV16 L1重组质粒、pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13815-27和pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13896-138嵌合重组质粒。 [3]成功构建的重组毕赤酵母甲醇诱导后，SDS-PAGE和Western blot证实重组酵母菌裂解产物存在目的蛋白。肝素亲和纯化后，透射电镜观察到了直径大约55nm的VLPs。 [4]小鼠免疫后，ELISA结果显示，HPV16 L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒能诱导小鼠产生高水平的HPV16 L1特异性和HCMV UL138特异性的IgG抗体。 结论: [1]应用免疫信息学方法预测了HCMV UL138优势的B细胞和CTL表位。 [2]根据酵母密码子偏爱性优化了野生型HPV16 L1基因，构建了pPIC3.5K/HPV16 L1重组质粒、 pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13815-27和pPIC3.5K/HPV16 L1/UL13896-138嵌合重组质粒。 [3]利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了HPV16 L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒，并在透射电镜下观察到了直径大约55nm的颗粒，为后续的免疫效应研究奠定了基础。 [4]小鼠免疫结果证实，HPV16 L1-UL138多表位嵌合病毒样颗粒能诱导高水平的HPV16 L1和HCMV UL138特异性抗体，为HCMV疫苗的进一步研制奠定了基础。