量子点和纳米金的合成及其在免疫分析中的应用

来源 :苏州大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:ytw2001
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纳米技术和生物技术是21世纪的两大热门领域,在这两者之间存在着许多技术交叉。其中,纳米探针技术和传感技术就是纳米技术、生物技术与探针技术和传感技术相结合的产物,已经引起了人们的广泛关注。纳米材料是指在三维空间中至少有一维空间的尺度在1 nm~100 nm之间的物质。具有独特的化学性质和物理性质,如表面效应、微尺寸效应、量子效应和宏观量子隧道效应等,呈现出常规材料不具备的优越性能。将纳米材料引入生物探针和传感领域后,如何利用纳米材料构建纳米粒子探针和传感器、提高分析测定的灵敏度、稳定性和其它性能,建立不同分析对象的分析方法,使其在实际应用中真正得到更好和更广泛的应用,仍然是存在的一个问题。免疫分析是利用抗原一抗体特异性反应来测定痕量物质的一种高灵敏度、高选择性的方法。纳米材料的介入为免疫分析的发展提供了无穷的想象空间,可把免疫分析方法的性能提高到新的水平,使其不仅检测的速度快、精度高、可靠性好,还能实现多功能化和选择检测。本论文利用量子点的独特光学性质构建荧光探针、利用纳米金的比表面积大,吸附力强等性质构建免疫传感器,将它们应用于荧光免疫分析、电化学免疫分析等方法中,结果表明纳米粒子大大提高了免疫分析方法的选择性和灵敏度。本论文包括以下内容:第一章:就免疫分析技术,纳米粒子量子点的合成、在生物化学分析中的应用及纳米金技术在免疫分析的应用及发展趋势作一概述。第二章:探讨了纳米荧光磁性颗粒Fe3O4/CdTe的合成与应用:采用化学共沉淀法制备Fe3O4纳米颗粒,并用天冬氨酸对其表面进行修饰,通过天冬氨酸与Fe3O4纳米颗粒之间的化学作用,使Fe3O4纳米颗粒表面带上功能性基团氨基,利用EDC和NHS作为连接试剂,合成了Fe3O4/CdTe荧光磁性纳米颗粒。对该纳米粒子进行了荧光、紫外、XRD、电镜、磁性等性能的系列表征。结果表明,该纳米粒子既具有一定的磁性功能,又具有较好的荧光特性。在油相中合成了稳定的CdSe/CdS纳米晶,并且通过巯基乙酸为稳定剂和修饰剂实现水溶性量子点的制备。该量子点用于以下分析。第三章:首次利用水溶性CdSe/CdS量子点作为荧光探针,金磁微粒作为固载相固定上瘦肉精抗体,利用免疫分析竞争法原理,实现了较低下线地检测猪肉中的瘦肉精的目的。该方法对瘦肉精检测的线性范围是0.50~20000.00 ppb,线性相关系数为0.992,检出限为0.50 pg·mL-1。在本研究中,利用量子点优良的荧光特性和金磁微粒的对生物大分子的固载以及磁性分离等性质,并结合免疫分析的特异性识别,建立了测定痕量物质的一种高灵敏度、高选择性的方法,并有望将此检测方法用于其它小分子有害物质的检测中。第四章:利用水溶性CdSe/CdS量子点作为荧光探针,金磁微粒作为固载相固定上氢化可的松抗体,利用免疫竞争法原理,实现了较低下线地检测化妆品中的氢化可的松的目的。该方法对氢化可的松检测的线性范围是0.50~15000.00 ppb,线性相关系数为0.994,检出限为0.50 pg·mL-1。第五章:利用水溶性CdSe/CdS量子点作为荧光探针,酶标板作为固载相,根据免疫分析竞争法原理,实现了较宽的检测范围,较低的检测下限检测化妆品中的雌三醇的目的。该方法对雌三醇的检测的线性范围是1.00 pg.mL-1~100.00 ng.mL-1,线性相关系数为0.996,检出限为1.00 pg.mL-1。纳米金的合成及对电化学免疫传感器信号的增强作用:以下两章主要利用具有强吸附效应的纳米金颗粒、壳聚糖的生物相容性、复合纳米材料聚酰胺-胺(树状大分子)的高枝化度、单分散性、分子中有大量的含N官能团和端基官能团,抗体(抗原)固定在不同的基体电极上,直接测定抗原与抗体反应前后的电位变化。方法较传统的ELISA和放射性免疫分析(RIA)简单、快速,可望作为一种临床诊断分析的工具。第六章:利用新型材料金纳米空心球,通过层层修饰的技术,分别将壳聚糖、金纳米空心球、铁蛋白抗体修饰到玻碳电极表面,制备了灵敏度高、寿命长、可重复使用的一种新型的铁蛋白电化学免疫传感器。该传感器对铁蛋白检测的线性范围是1.0 500 ng·mL-1,检出限为0.1 ng·mL-1。该电极具有良好的选择性、重现性和稳定性。该方法与酶联免疫吸附测定法相比较,测得血清样品中铁蛋白含量基本一致。结果表明,该方法对实际样品中铁蛋白含量的检测是比较快速而准确的。第七章:基于纳米金及聚酰胺-胺(树状大分子)为载体电位型的前列腺特异性抗原免疫传感器的研究。在电极敏感膜-PVC膜上,双层纳米金溶胶与聚酰胺-胺树状大分子形成三明治式结构,固定上前列腺特异性抗体,从而制成了性能优良的前列腺特异性抗原电化学免疫传感器。该传感器对前列腺特异性抗原检测的线性范围是0.5 18 ng·mL-1,斜率为0.9663 mV/decade,线性相关系数为0.9757,检出限为0.1 ng·mL-1
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