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国兰(Chinese Cymbidium)主要包括春兰(Cymbidium goeringii)、蕙兰(Cymbidium faberi)、建兰(Cymbidium ensifolium)、墨兰(Cymbidium sinense)、春剑(Cymbidium tortisepalum var. longibracteatum)、莲瓣兰(Cymbidium tortisepalum)、豆瓣兰(Cymbidium serratum)等8种地生兰类型。国兰种类多样,品种繁多,近些年来种间杂交及种内杂交又得到快速发展,这给国兰品种的分类和遗传多样性研究带来了很大的困难。一直以来,国兰多以形态学性状,尤其是花部形态性状作为品种分类的依据。然而,形态学分类在国兰品种分类中,特别是杂交品种分类中存在很大的局限性。本研究对63个国兰品种(系)的形态调查,并采用SRAP分子标记对其进行多态性分分析及UPGMA聚类分析,在分子水平上探讨国兰的遗传多样性以及试图找出杂交品种的亲本来源,以期为国兰的品种鉴定、分类,确定亲本来源、品种保护以及指导杂交育种提供有价值的参考资料。本研究取得的主要成果如下:(1)本试验比较了变色硅胶干燥和液氮速冻两种方法保存的国兰叶片提取的DNA质量,结果表明由变色硅胶干燥的国兰叶片所提取的DNA完整性较好,无明显降解,质量较高,在减少多糖类及其他代谢产物的产生等方面甚至优于液氮速冻。因此变色硅胶保存法适用于国兰野外或远距离采样时的保存方法。(2)本试验以国兰杂交品种(系)为材料,采用L16(45)正交试验设计对Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、模板及引物等5个重要影响因素进行优化,确定国兰杂交品种(系)SRAP-PCR反应的最优反应体系为(25μL体系):Taq DNA聚合酶:1U; Mg2+:1.8mM; dNTPs:0.08mM;模板DNA:100ng;引物:上下游各0.3mM;10×PCR Buffer:2.5μL。此外,本试验采用DNA混合池技术(DNA pooling)快速筛选SRAP引物,从180对SRAP引物组合中筛选出32对扩增产物丰富、多态性高的引物组合。与常规方法相比,该技术明显缩短试验周期、节约了模板用量,为快速高效筛选SRAP引物提供了新思路。(3)本试验使用筛选出来的32对SRAP引物组合,对63个国兰品种(系)进行扩增,共扩增条带(NTL)923条,平均每对引物组全合产生28.84条,在扩增的条带中具有多态性条带有(NPL)881条,多态性位点百分率(PPL)为95.45%,说明国兰品种(系)在分子水平上具有很高的遗传多样性。(4)本试验研究的63个国兰品种(系)的居群间Nei’s遗传距离的变化范围在0.0448-0.1541之间,遗传相似度变幅为0.8572-0.9524。遗传相似系数在0.6890左右处,63个国兰品种(系)分为7类,除个别春兰原生种外,基本能把各个种区分开,亲本相同的杂交品种(系)也优先聚于一类,同时也验证了部分交杂的亲本来源。(5)遗传变异的分析显示,所选6个原生种类群间的变异在总的遗传变异中平均占55.93%(Gst=0.5593),45.07%的遗传差异出现在类群内,说明国兰种间具有较强的遗传分化趋势。