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目的:探讨慢性肾功能衰竭中医湿证的血清蛋白质谱的变化及生物学基础;并通过生物信息学方法建立中医湿证的鉴别诊断模型;为早期临床诊断提供借鉴,为中医证型的微观辨证提供依据,为中医诊断的客观化发展提供思路。
方法:收集慢性肾功能衰竭患者83例及正常对照组36例,依据《中药新药临床研究指导原则》辨证分型,采用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术对湿证组与非湿证组患者的血清蛋白质表达谱峰进行研究,并运用层次聚类分析和主成分分析对湿证组和非湿证组进行分析。
结果:
(1)利用方差分析对湿证组、非湿证组及正常对照组三组数据进行检验鉴定差异表达蛋白质谱峰。发现有18个差异蛋白质谱峰有统计学意义(p<0.001);而后扩大样本,利用wilcoxon sum rank test将湿证组、非湿证组及正常对照组三组的蛋白质谱峰值做两两比较,发现湿证组与非湿证组之间得到6个差异蛋白质谱峰(P<0.01),即M/23377.16、M/23319.09、M/26635.66、M/26639.83、M/26842.43和M/213711.7,且湿证组的差异蛋白质谱峰表达值低于非湿证组;湿证组与正常对照组之间得到32个差异蛋白质谱峰(P<0.01);非湿证组与正常对照组之间得到28个差异蛋白质谱峰(P<0.01)。利用层次聚类分析发现湿证组与非湿证组之间聚类性质差异较小,运用主成分分析发现,两组样本之间可基本分开。(2)利用方差分析对中医虚证各组进行鉴定差异表达质谱峰,发现有17个差异质谱峰有统计学意义(p<0.001);而后扩大样本,利用wilcoxon sum rank test对虚证各组之间蛋白质谱峰值做两两比较,发现脾肾气虚组与脾肾阳虚组之间得到2个差异蛋白质谱峰(P<0.01),即M/26799.30、M/27770.29;脾肾气虚组与阴阳两虚组得到4个差异蛋白质谱峰(P<0.01),M/26799.30、M/28770.08和M/28916.07和M/27935.69;脾肾气虚组与脾肾气阴两虚组之间得到5个差异蛋白质谱峰(P<0.01),即M/28916.07、M/23377.16,M/23401.63,M/23448.02及M/23491.97;脾肾阳虚组与阴阳两虚组之间得到4个差异蛋白质谱峰(P<0.01),即M/Z5558.67、M/Z7770.29、M/24476.03和M/Z6639.83;脾肾阳虚组与脾肾气阴两虚组之间得到4个差异蛋白质谱峰(P<0.01),即M/Z3377.16、M/Z3401.63、M/Z6635.66和M/Z6639,83,阴阳两虚组与脾肾气阴两虚组之间得到2个差异蛋白质谱峰(P<0.01),即M/Z3377.16和M/Z3401.63。运用层次聚类分析,发现各虚证组之间差异较小,病例组与正常组之间差异较大;运用主成分分析,对虚证各证型组两两分析,发现同组内样本彼此靠近,而组间样本彼此分开。
(3)依据生物信息学方法,构建了“湿证组-非湿证组”鉴别诊断的决策树模型,其预测正确率为83.13%,灵敏度为82.14%,特异度为85.19%。且“湿证组-非湿证组”鉴别诊断的决策树模型所选取的差异蛋白质谱峰与中医虚证各证型组间的差异蛋白质谱峰存在差异。
结论:
(1)应用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术对湿证组与非湿证组患者的血清进行研究,发现的6个差异蛋白质谱峰与这两组相关联系较密切的血清蛋白质因子,且湿证组的差异蛋白质谱峰表达值低于非湿证组。
(2)中医虚证各证型组之间的差异蛋白质谱峰能在一定程度上区别各证型组,对于组间的鉴定有借鉴意义,能从血清蛋白组学的角度反映中医证型之间的差别,对中医证型的辩证提供一定的依据。
(3)依据生物信息学方法,建立了“湿证组-非湿证组”鉴别诊断决策树预测模型;其预测正确率为83.13%、灵敏度为82.14%,特异度为85.19%;该模型具有较好的科学价值及临床借鉴意义。
(4)采用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术分析慢性肾功能衰竭中医湿证血清蛋白质谱变化对探讨中医湿证的生物学基础具有一定的科学意义。