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目的：巨噬细胞吞噬氧化低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoproteins, ox-LDL)并转化为泡沫细胞。研究发现,泡沫细胞大量死亡可导致局部堆积大量脂质,斑块进展甚至破裂。细胞死亡方式包括：自噬性死亡,凋亡和坏死。丙酮酸乙酯(Ethyl pyruvate,EP)是一种丙酮酸衍生物,多个研究显示该药物能通过抑制细胞自噬和凋亡,减少细胞死亡,从而发挥对脏器的保护作用。本研究拟观察EP对泡沫细胞自噬和凋亡的影响,并初步探讨可能的机制。方法：1.THP-1源性泡沫细胞模型的构建：用不同浓度ox-LDL(0mg/L～150mg/L)诱导构建THP-1源性泡沫细胞模型。之后用油红O染色鉴定造模情况,用MTT法测细胞生存率。2. ox-LDL刺激对泡沫细胞自噬和凋亡的影响：THP-1细胞经PMA诱导贴壁后,给予不同浓度的ox-LDL(0mg/L～150mg/L)孵育24小时,用流式细胞术检测细胞自噬和凋亡水平,以筛选最佳模型构建条件。3.EP对THP-1源性泡沫细胞自噬及凋亡的影响：用上述研究筛选的最适ox-LDL浓度刺激泡沫细胞生成,应用不同浓度EP(5mM-20mM)进行干预,观察其对泡沫细胞自噬和细胞凋亡的影响。分组如下：①对照组：不加任何干预因素：②泡沫细胞组：加入100mg/L的ox-LDL;③低浓度EP组：加入100mg/L的ox-LDL和5mM的EP；④中浓度EP组：加入100mg/L的ox-LDL和10mM的EP；⑤高浓度EP组：加入100mg/L的ox-LDL和20mmM的EP。共同孵育24小时后,用western blot、流式细胞术、免疫荧光、PCR技术观察细胞自噬水平、细胞凋亡率。评估不同浓度EP对THP-1源性泡沫细胞脂质蓄积、细胞自噬和细胞凋亡的影响。用免疫荧光、PCR技术评估各组HMGB1水平表达的差异。4.EP对泡沫细胞自噬和凋亡影响可能的分子机制：用免疫荧光、PCR技术评估ox-LDL组与ox-LDL+20mMEP组HMGB1、Beclin1、Rage等基因水平表达的差异,探讨EP作用于泡沫细胞自噬和凋亡水平可能的机制。结果：1.ox-LDL为25mg/L时,细胞生存率即下降至87.18%±5.34%(与对照组比较P<0.05)。随着ox-LDL浓度升高,细胞活力逐渐下降,油红O染色可见泡沫细胞内大量脂滴。2.THP-1源性泡沫细胞自噬率及凋亡率水平随着ox-LDL浓度增高增加,0mgL组,25mg/L组,50mg/L组,100mg/L组,150mg/L组的自噬率分别为0.05%±0.01%,1.28%±0.32%,2.09%±0.17%,5.01%±0.33%,5.41%±0.27%,凋亡率分别为10.01%±0.19%,20.36%±3.42%,29.83±6.27%,49.29%±10.66%,62.70%±1.95%。但100mg/L组与150mg/L组间差异均无统计学意义(P>0.05)。3.流式细胞术、]eal-time PCR. Western blot等检测手段证实,随着EP浓度增高,自噬率、自噬相关基因的表达水平逐渐下降。泡沫细胞组凋亡率较对照组明显增加(48.77±7.22 VS 5.87±1.03)(P<0.05)。不同浓度EP组(5mM,10mM,20mM)细胞凋亡率分别为26.12%±3.99%,12.92%±1.32%,9.46%±0.53%,均较泡沫细胞组明显下降(P<0.05),凋亡标志性蛋白caspase-3表达随着EP浓度增加而减少。即随着EP浓度升高,凋亡率下降明显。4.免疫荧光染色、PCR显示ox-LDL+20mMEP组HMGB1、Beclin1、Rage和TNF-a基因mRNA表达水平较ox-LDL组显著下降。结论：1.以PMA诱导THP-1细胞24小时可以促使该细胞贴壁分化为巨噬细胞；之后再以ox-LDL诱导泡沫细胞形成。方法简单可重复性好。2.在ox-LDL诱导THP-1源性泡沫细胞中自噬和凋亡水平较对照组均增加。3.不同浓度EP可以抑制泡沫细胞中的自噬和凋亡,呈浓度依赖性。4.EP可能是通过抑制HMGB1减少了HMGB1-Beclin1互动及抑制HMGB1-RAGE通路来减少泡沫细胞中的自噬；可能是通过HMGB1-TLR4-TNF-α轴通路来抑制凋亡现象。