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目的本课题立足于中医中药,开展益气养阴方对Graves病小鼠白细胞保护作用及其机理研究,用基因枪给小鼠造模,选取小鼠外周血白细胞计数、甲状腺功能、甲状腺组织学病理变化、细胞凋亡相关基因、IL-13、PPAR-Y等指标进行检测,深入探讨并初步揭示益气养阴方对GD白细胞保护作用及其作用机理,提供药效学理论依据,完善益气养阴方系统研究；进一步发挥中医药特色与优势,提高益气养阴方对GD及其并发症的临床疗效,减少西药抗甲状腺药物毒、副作用；同时,比较益气养阴方不同剂量之间的疗效差异,探讨益气养阴方的组方合理性,为进一步开发新药物奠定理论基础与实验依据。方法采用基因枪免疫Balb/c雌性小鼠建立GD模型,再将造模后GD小鼠随机分为五组：1模型组；2益气养阴方低剂量组；3益气养阴方中剂量组；4益气养阴方高剂量组；5他巴唑组；另一组是未造模的正常对照组。分别对各组应用益气养阴方高、中、低剂量和西药干预治疗,并运用放射免疫分析法检测甲状腺激素；对核转录因子PPAR-γ采用免疫组化法；逆转录多聚酶链法(RT-PCR)等方法检测细胞凋亡相关基因、IL-13的表达；运用流式细胞仪检测骨髓细胞周期及CD45分子的表达结果1小鼠外周血白细胞计数的实验结果中药益气养阴方高、中、低剂量组和模型组、正常对照组比较没有显著性差异,P>0.05；与西药组比较有非常显著性差异,P<0.01；西药组与正常对照组比较,有非常显著性差异,P<0.01；模型组和正常对照组比较,没有显著性差异,P>0.05。2 GD小鼠甲状腺激素的实验结果模型组小鼠的血清FT3、FT4明显升高,与正常对照组比较有非常显著性差异(P<0.01),尤以FT4升高更为明显,进一步说明我们的造模是成功的。中药益气养阴方高剂量组和中药中剂量组比较有显著性差异,P<0.05,与中药低剂量组之间比较有非常显著性差异,P<0.01；表明在改善甲状腺功能方面,中药高剂量较中药中、低剂量效果好。中药高剂量组和他巴唑组与正常对照组比较没有显著性差异,P>0.05；中药中、低剂量组与他巴唑组相比,差异显著,P<0.01；中药高剂量组与他巴唑组比较没有显著性差异,P>0.05。3小鼠骨髓细胞CD45分子表达的实验结果CD45分子表达是通过横断的CD45+细胞道数来表现的。正常对照组CD45+细胞的通过率最高,为99.59%；中药高剂量组CD45+细胞的通过率为98.57%；中剂量组为98.39%；低剂量组为97.51%；这三者均与模型组、正常对照组比较有非常显著性差异,P<0.01；他巴唑组为94.22%,与中药高、中剂量组、正常对照组比较有非常显著性差异,P<0.01；模型组为91-26%,与中药高、中、低剂量组比较有非常显著性差异,P<0.01；与正常对照组、他巴唑组比较没有显著性差异,P>0.05。上述比较结果表明经益气养阴中药治疗,小鼠骨髓细胞CD45分子表达增加,这也意味着CD45+细胞的通过道数增加。4小鼠骨髓细胞凋亡相关因子bax,bcl-2mRNA表达的实验结果模型组baxmRNA表达水平有所降低,与正常对照组比较没有显著性差异,P>0.05；西药他巴唑组baxmRNA表达明显增高,与正常对照组比较有非常显著性差异,P<0.01；益气养阴方高、中剂量组与模型组、正常对照组比较没有显著性差异,P>0.05；益气养阴方低剂量组、他巴唑组与模型组、正常对照组比较有非常显著性差异,P<0.01。模型组bcl-2mRNA表达水平有所升高,与正常对照组比较没有显著性差异,P>0.05；西药他巴唑组bcl-2mRNA表达明显降低,与正常对照组比较有非常显著性差异,P<0.01；益气养阴方高、中剂量组与模型组、正常对照组比较没有显著性差异,P>0.05；益气养阴方低剂量组、他巴唑组与模型组比较有显著性差异,P<0.05；益气养阴方低剂量组与正常对照组比较有显著性差异,P<0.05；他巴唑组与正常对照组比较,差异非常显著,P<0.01。5小鼠IL-13mRNA的实验结果模型组IL-13mRNA表达水平有所降低,与正常对照组比较没有显著性差异,P>0.05；西药他巴唑组IL-13mRNA表达明显降低,与正常对照组和模型组比较有显著性差异,P<0.01；中药治疗组的IL-13mRNA表达与正常对照组比较没有显著性差异,P>0.05。经中药益气养阴方治疗,小鼠IL-13mRNA的表达下调,即中药高剂量组表达最低,依次增高。表明中药益气养阴方有促进免疫细胞成熟、活化、增殖和免疫调节的作用。6小鼠PPAR-γ的实验结果PPAR-γ免疫反应阳性细胞为细胞核染成棕黄色或有棕黄色颗粒沉积.模型组小鼠PPARγ表达量较少(+).经中药益气养阴方治疗,小鼠PPAR-γ的表达上调。益气养阴高剂量组PPAR-γ表达显著增加(++++)；益气养阴中剂量组PPAR-γ表达(+++)；依次表达下调。结论1用基因枪免疫Balb/c雌性小鼠构建的GD动物模型,表达出动物GD主要特征,用其进行药物及病理等方面的研究具有可行性和实用性。2中药益气养阴方能够改善甲状腺激素水平,具有治疗GD的作用。中药高剂量效果与他巴唑相当,中药中、低剂量效果则不及。3中药益气养阴方既能治疗GD,同时又不至于引起外周血白细胞的减少,避免了西药的毒、副作用,效果优于他巴唑。中药高剂量效果优于中药中、低剂量。4中药益气养阴方对GD白细胞的保护作用体现在它能调节Graves病小鼠的骨髓细胞凋亡水平,抑制骨髓细胞凋亡,使骨髓细胞凋亡恢复正常。其对骨髓细胞凋亡抑制,使白细胞升高,增加免疫力,这一点可能是益气养阴方对白细胞保护作用机制所在,而bcl-2、bax基因可能是其作用靶点。