硫氧还蛋白f介导的烟草Rubisco活化酶氧化还原调控的初步研究

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1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)既催化RuBP的羧化反应又催化其加氧反应,是影响植物净光合速率高低的一个关键酶。然而它的催化效率却很低,除此之外它在体内还需要Rubisco活化酶对其进行活化。近年人们发现,以拟南芥为代表的,含有大(α)和小(β)双亚基Rubisco活化酶在植物体内是通过其α亚基和硫氧还蛋白f接受氧化还原调控。但是以烟草为代表的,仅含有β亚基的植物是否通过硫氧还蛋白接受氧化还原调控还没有相关报告。通过对烟草和拟南芥等来源的Rubisco及其活化酶的氧化还原调控的研究,初步得出以下2个结论:1.验证了烟草Rubisco的活力也受氧化还原调控,而且硫氧还蛋白f介导了烟草Rubsico活化酶的氧化还原调控。通过从叶片提取和原核表达的方法分别获得拟南芥和烟草的硫氧还蛋白f以及烟草的Rubisco活化酶,通过在不同条件下测定烟草与拟南芥Rubisco活化酶的表面巯基数变化、活化Rubisco活力和ATP水解酶活性,结果表明仅含有β亚基的烟草Rubisco活化酶也与其他具有双亚基的Rubisco活化酶相似,也通过硫氧还蛋白f接受氧化还原调控。这与之前学者的论断是完全不同的(Zhang等,2001)。2.硫氧还蛋白f对Rubisco活化酶的氧化还原调控与Rubisco活力调控一样具有种属特异性。烟草的硫氧还蛋白f只能对单亚基的活化酶进行氧化还原调控,而拟南芥的硫氧还蛋白只能对双亚基的Rubisco活化酶进行氧化还原调控。通过对Rubisco活化酶的序列比对,我们发现Rubisco活化酶335、359、378位点的氨基酸位点在种属之间分别是保守的,在335位点上,双亚基物种的RCA都是甲硫氨酸(M),而单亚基物种RCA都是亮氨酸(L)。在359位点上,双亚基物种的RCA都为丝氨酸(S),单亚基物种的RCA番茄和烟草都为赖氨酸(K),玉米为天冬酰胺(N)。在378位点,双亚基物种RCA为甘氨酸(G),而单亚基物种RCA却各有差异:番茄为苏氨酸(T),烟草为丙氨酸(A),玉米为赖氨酸(K)。在此基础上,我们对拟南芥的Rubisco活化酶上述位点进行突变,将其替代为烟草中的氨基酸残基,结果发现335位点上的拟南芥RCA位点被替代后,其ATP水解酶活性在烟草硫氧还蛋白f存在的情况下,还原状态下ATP水解酶活性增加33%(氧化状态下,活性下降30%),说明烟草Rubisco活化酶的L335位点氨基酸残基可能与Rubisco活化酶种属特异性有关,但是具体的机制需要进一步的研究。
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