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组织金属蛋白酶抑制因子家族(TIMP)是金属蛋白酶(MMP)天然的在组织中的抑制因子，TIMPs与MMPs两大酶系之间的平衡是胞外基质(ECM)稳态的重要条件之一。TIMP-1是TIMP家族中第一个被发现的成员，对其的研究一直在不断的深入。目前发现其功能不仅仅局限于对MMP的抑制，而是个多功能的分子。 肝癌不仅是我国，也是世界上高发病率、高死亡率的恶性疾病之一，如何对其进行及时、有效的诊断、治疗一直是医疗界，学术界研究的重点和难点。本论文以BEL-7402肝癌细胞系进行了TIMP-1的功能研究。 1．运用免疫组织化学技术，对肝硬化、肝细胞癌患者以及正常肝的组织中TIMP-1的含量进行了分析。发现在癌组织中存在TIMP-1的高表达，而正常肝组织表达较低，在肝硬化组织中TIMP-1的含量最高，与病理相符；进而对肝癌细胞系BEL-7402，源自癌旁的细胞系QSG-7701及肝细胞系L-02进行了TIMP-1的半定量RT-PCR研究，实验结果也支持在肝癌细胞中存在TIMP-1 mRNA高表达的结论。 2．首次发现TIMP-1在肝癌细胞中的核内分布现象。通过免疫组化研究，发现在肝癌细胞BEL-7402以及肝细胞癌组织切片中，细胞核内均有阳性信号出现，而GFP的亚细胞定位也支持存在TIMP-1的核内分布现象。结合文献报导的一些细胞中的TIMP-1核内分布现象，提示TIMP-1在细胞核内的分布可能不是特殊的情况。运用免疫组化双染色技术，发现TIMP-1的核内分布与PCNA呈现一定的负相关，提示TIMP-1入核的细胞可能不处于活跃增殖的状态。而双氧水的处理可诱导增加TIMP-1的入核。对其可能的机制进行了探讨。 3．对TIMP-1在细胞周期调控中的作用进行了分析。MTT试验以及生长曲线均提示，TIMP-1对肝癌细胞的增殖有抑制作用，但对L-02细胞系无影响，有趣的是，TIMP-1对源自癌旁的QSG-7701细胞系也有一定抑制作用。在哺乳动物细胞中，一系列周期素依赖激酶(cyclin dependent kinases，CDKs) 和周期素＊yclins）结合，催化细胞周期进程，周朋素依赖激酶抑制因子 （yClill dCPefldCflt kifl8SC ilthibitofS，CKIS）抑韦它 Ir］的活性或结合，是细 胞周期的负调控因子。对细胞周期的调控存在着多种途径，通过CDK抑制 回了是重要白途径，如pZIv‘”，p27卜”‘等。对TINIPI抑韦增殖白作用机韦 进行的研究发现，TIMP1可上调p“F服告基因的表达，提示TIMPI对 增殖的抑制至少部分是通过上调C＊K抑制子pZ／讣’来实现的，该结论也得 到pZI WA”的半定量RTPCR结果的支持。 4．对TIMPJ在细胞迁移中的作用进行了研究。WOund Assay、单细胞迁移检 测等的结果表明，TIMPI还可抑制肝癌细胞的迁移，提示其在肝癌治疗中 的作用。对TIMP－1抑制迁移的内在机制进行了尝试性的研究。因微丝在骨 架的变化与细胞本身的运动中发挥着重要的作用，猜测TIMPl对迁移的影 啊是可能与凋控肌动蛋白微丝的解离和重聚有关。运用免疫组化技术检测 了Factin在转染6U后的变化情况，发现TIMPI位于核内的和分布于胞质的 细胞，细胞核部分经鬼笔环肽处理后信号均较弱，部分细胞膜周边信号较 强，部分细胞则与未转染TIMP－1的类似，即微丝的结构，含量，分布均未 发生显著的变化。 5．研究还首次发现，TIMPI可能作为一种信号分子，通过pZI”’‘途径参与 了IL－6对BEL7402细胞增殖的抑制。MTT试验以及生长曲线均提示，IL－6 对BEL－7402细胞的增殖有抑制的作用。己有研究发现，IL七可在一些细胞 中通过MAPK途径和JAKSTAT3途径对TI＊P刁进厅调控。Luciferase Assay 结果表明在BEL7402细胞中，IL七也可通过JAK－STAT3信号转导途径上调 TIMP刁的表达，而之前发现TIMP才又可通过上调pZI“’＊对细胞周期进行 负调控，所以IL6对BEL－7402的增殖抑制可能至少是部分出如下的途径介 导的：IL七至通过MAPK和JAK－STAT3途径上调TIMPJ的表达，而TIMPI 又通过对pZI WAF’的上调，抑制细胞增殖，同时STAT3也上调pZI“F’。即 TIMP．l可能作为一种调控因子，参与了IL－6对BEL－7402的增殖抑制作用。 TIMP的这种作为调节因子类似物效应于外部信号的具体机理是什么，是 否还参与了其他的某些生理功能，与其它信号传导子的相互关系怎样，是 否与其在核内的分布有关或有联系，其结构基础是什么，是否涉及其C端 －2－ 特性，有待作进一步的研究。6．在动物体内进厅了 TI