【摘 要】
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本研究旨在通过优化ES细胞培养条件,首先模拟肝脏体内分化发育,分阶段、定向诱导E14小鼠ES细胞分化为肝细胞,从形态学、特异性基因表达和功能测定三个水平对诱导细胞进行分析
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本研究旨在通过优化ES细胞培养条件,首先模拟肝脏体内分化发育,分阶段、定向诱导E14小鼠ES细胞分化为肝细胞,从形态学、特异性基因表达和功能测定三个水平对诱导细胞进行分析、鉴定.在此基础上,对诱导肝细胞进行凝血因子Ⅷ、Ⅸ表达格局分析.这无论在研究构思上还是在ES细胞定向诱导分化研究方面均属新的尝试,本研究将为血友病的细胞替代治疗研究提供新的思路和供体细胞来源.同时,我们拟进行小鼠ES细胞诱导为心肌细胞的研究,目前有关小鼠ES细胞分化为心肌细胞的研究报道,基本是在未添加任何因子条件下,进行体外分化培养,诱导小鼠ES细胞形成具有自发性节律收缩的心肌细胞.但是有学者发现,虽然在未添加生长因子情况下进行分化培养,ES细胞可以自发分化为多种类型细胞,包括自发节律收缩的心肌细胞;而若有生长因子存在,则可以产生数量更多的、高度分化且类型均一的特定细胞.因此,本研究尝试将酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)和肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)作为刺激因子,体外分阶段、定向诱导E14小鼠ES细胞分化为心肌细胞,希望获得更多的、分化均一的心肌细胞.本研究无论对于ES细胞诱导分化研究,还是获得丰富的供体细胞来源用于细胞替代治疗,都具有十分重要的研究和应用意义.本研究方案包括:一、小鼠ES细胞的培养、鉴定与优化二、体外定向诱导E14小鼠ES细胞为肝脏细胞及其凝血因子格局分析三、体外定向诱导E14小鼠ES细胞为具有节律性收缩的心肌细胞
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