葡萄SVP-like MADS-box、MADS12基因的克隆与植物表达载体的构建

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葡萄是世界上最重要的果树之一,其种植面积和产量都在世界前列。研究花发育的机理对果树栽培、育种工作的发展以及促进果品生产都具有重要的意义。本试验以藤稔葡萄的花序为试材,应用电子克隆技术从葡萄EST数据库中拼接到两个MADS-box基因,并用RT-PCR方法扩增得到了该基因的编码区全长序列,分别命名为VvSVP和VvMADS12。结果如下:VvSVP基因序列编码区全长684 bp,编码227个氨基酸残基,与PtMADS1、MdJOINTLESS、PkMADS、SVP分别有84.1%、81.7%、78.9%和74.9%的同源性。该序列具有MADS-box基因典型的MADS-box和K-box结构域。系统发育分析同样将VvSVP基因归入MADS-box基因家族的STMADS11进化系。电子表达谱分析显示,该基因在葡萄的芽、叶片、花序及果实中表达,在花、花梗、茎、根中不表达,推测该基因与葡萄花序及果实发育有关。将VvSVP mRNA与基因组序列比对发现,VvSVP基因由8个外显子,7个内含子组成,与SVP基因的结构不完全相同。VvMADS12基因序列编码区全长630 bp,编码209个氨基酸残基,与PdMADS-box、AmDEFH7、MODEFH7、SlTDR8、CsMADS-box、PrMADS-box、ZmMADS15分别有70%、63%、62%、60%、66%、45%和50%的同源性。该序列具有MADS-box基因典型的MADS-box和K-box结构域。系统发育分析将VvMADS12基因归入MADS-box基因家族的TM3进化系。分析VvMADS12 mRNA的表达谱,结果表明:VvMADS12基因在葡萄的花序、花梗、茎中表达,在花、果实、叶、根中没有检测到,说明VvMADS12与葡萄花序发育有关。将VvSVP mRNA与基因组序列比对发现,VvSVP基因由8个外显子,7个内含子组成。成功构建了VvSVP和VvMADS12基因的植物双元表达载体。
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