基于高通量Illumina测序技术的干旱胁迫下大豆根和叶mRNA表达谱研究

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非生物胁迫具有一个复杂特性,它涉及高盐,低温,土壤干旱和贫瘠。农作物必须适应各种极端胁迫环境。大豆是一种重要的经济作物,其产量明显的受干旱胁迫影响,因此培育与耐旱相关的作物已成为当务之急。虽然目前在研究耐旱机理方面取得了一定的进展,但是耐旱的分子机制仍然不十分清楚。为了更好的理解大豆响应干旱胁迫的分子机制,同时克隆大豆中与干旱密切相关的干旱应答基因,我们研究了旱碱1号大豆幼苗在干旱胁迫(含有2% PEG 8000的Hoagland培养液)下48小时根和叶的转录表达谱。基于前期的一些实验,我们通过高通量Illumina测序研究基因在转录水平的表达,同时应用生物信息学软件对测序结果进行分析。本文其主要研究结果如下:1.干旱胁迫下根和叶中分别有2956个和1620个差异表达基因。其中,根特异性差异基因2383个,叶特异性差异基因1047个,根叶共表达差异基因573个。2.BGI WEGO软件对差异表达基因进行了主要生物学功能分类。干旱胁迫下所有差异表达基因中,描述基因细胞组件的有11类,描述基因分子功能的有12类,描述基因参与的生物过程的有16类。3.通过cluster和javaTreeview软件,对根叶共表达差异基因进行了聚类分析,在逆境条件下表达相似的基因成簇的聚到一起。4.通过对干旱胁迫应答基因的研究发现干旱胁迫下与核苷酸途径相关的一些顺式作用元件和反式作用因子基因表达上调,进一步对这些基因在分子水平上进行分析,表明这些基因处在ABA依赖和ABA非依赖两大调控网络中,同时这些pathway彼此之间相互联系。5.应用Real-time RT-PCR方法验证分析了Illumina测序出的6个基因,结果表明这6个基因在干旱胁迫下表达量改变倍数和表达谱测序中获得的差异表达倍数基本一致,从而表明测序数据真实可靠。
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