癌症是危害人类生命和健康最严重的一类疾病,抗癌药物的研究一直是医学研究的热点,随着分子生物学和分子药理学对肿瘤本质和作用机制方面的阐述,中药抗肿瘤的研究水平也有了显著提高并展示出了广阔的前景。目前虽有多种治疗方法,临床治疗肿瘤西医一般采用手术、放疗、化疗三大疗法,疗效快捷,有五年生存率之说,但往往有明显的损伤和毒副作用。总体而言,综合治疗是肿瘤治疗的根本原则。而中医一般采用扶正祛邪、活血化瘀、清热解毒三大治则,讲究辨证论治,虽然对局灶的缩小或消除效果缓慢,但能改善机体的整体条件,其在抑制、杀伤肿瘤细胞,改善症状与体征,以及减轻放化疗不良反应等方面,都发挥着重要作用。因此,中医药防治肿瘤将成为未来抗肿瘤研究的发展趋势,对晚期癌症患者,可以采用中药治疗；对癌症患者身体体质无法接受放化疗者,可以选择中药治疗；对手术,放化疗患者身体体质产生损害和毒副作用者可以用中药提高体质,增强免疫力。研究中医药可以取各家之长,逐步走向多学科合作的、宏观与微观相结合的现代中医药学道路。目前,祖国传统中药在肿瘤的治疗方面已取得了令人注目的成就,大力开展中医药治疗肿瘤的研究是一个非常有意义的探索。蜈蚣三七提取物特点是：疗效好但毒性很小。过去的研究已经证实,该提取物作用的靶器官是胸腺和肾上腺,可上调胶原诱导性关节炎小鼠外周血免疫抑制性受体CTLA-4、诱导细胞凋亡因子Fas以及调节因子IL-10、IL-4、IFN-γ的表达水平,而对正常小鼠(除IFN-γ)外周血上述因子的表达水平无显著影响；其能上调由刀豆素(ConA)诱导小鼠脾淋巴细胞Fas mRNA的表达水平,使CTLA-4 mRNA水平恢复正常,蜈蚣三七提取物是新发现的具有改善类风湿性疾病病程作用的药物。大量的试验研究证明毛莨科银莲花属植物有较好抗癌活性,活性成分和作用机制已经被试验证明。蜈蚣三七为银莲花属,目前我们已经从蜈蚣三七中提取总皂苷成分,以此我们通过本次试验对其抗肿瘤作用进行研究。本实验以蜈蚣三七总苷、纯化蜈蚣三七总苷以及齐墩果酸三种药物,作用于人宫颈癌Siha细胞、人肝癌Hep3B细胞、人肝癌HepG2细胞、HEL人胚肺细胞,进行体外抗肿瘤研究,探讨中药成分或单体的作用机理。并根据细胞毒性最小,药物剂量最佳的原则从多次实验中筛选出最佳药物浓度剂量,为进一步研究蜈蚣三七成分的药理学毒性及开发新药提供实验基础。1.药物分组：本实验分为6个组,分别为蜈蚣三七总苷、纯化蜈蚣三七总苷以及齐墩果酸,同时设立阳性药物对照组(顺铂)、DMSO组、空白对照组(未加药组)。2.采用噻唑蓝(MTT)还原法测定各实验组对Siha细胞、Hep3B细胞、HepG2细胞、HEL细胞的生长抑制率。3.倒置显微镜观察各组药物作用于Siha细胞、Hep3B细胞、HepG2细胞、HEL细胞48h后的形态学变化。4.透射电镜进行细胞超微结构观察。5.流式细胞仪检测各组药物作用后Siha细胞的细胞周期分布和凋亡率。6.统计学分析。采用统计软件SPSS15.0分析,用独立样本的t检验,X2检验对统计数据进行分析,如有差异,多组间参数两两比较采用q检验。以a=0.05为检验水准。(1)Y轴为细胞存活率,X轴为药物浓度,制作细胞生长曲线。(2)利用公式计算细胞48小时细胞增殖抑制率。(3)通过EXCEL画图法做趋势线来求48小时IC60值。1.不同浓度不同药物分组的四种药物作用于体外培养的Siha细胞、Hep3B细胞、HepG2细胞、HEL细胞48h后,各实验组生长抑制率结果如下：1.1 Siha细胞：纯化蜈蚣三七总苷药抑制作用最强(IC50=28.89ug/ml),蜈蚣三七总苷药次之(IC50=39.64ug/ml),齐墩果酸药最弱(IC50=14.89ug/ml)。1.2 Hep3B细胞：纯化蜈蚣三七总苷(IC50=21.08ug/ml)和蜈蚣三七总苷药(IC50=84.10ug/ml)的抑制作用相当,齐墩果酸药最弱(IC50=19.75ug/ml)。1.3 HepG2细胞：齐墩果酸药抑制作用最强(IC50=25.51ug/ml),蜈蚣三七总苷药次之(IC50=89.70ug/ml),纯化蜈蚣三七总苷药最弱(IC50=54.21ug/ml)。1.4 HEL细胞：纯化蜈蚣三七总苷、蜈蚣三七总苷、齐墩果酸对HEL细胞一直作用不明显。2.药物作用后,Siha细胞的形态学变化。倒置显微镜下观察到：对照组：Siha细胞贴壁生长,弥散蔓延分布,呈纺锤形或多角形,细胞透亮,生长状态良好。实验组：细胞相互分离,透亮度差,贴壁大量减少,体积明显缩小,细胞缩小,可见大量细胞崩解碎片,细胞核缩小或崩解消失。3.电镜进行细胞超微结构观察,用药后的细胞肌浆网明显扩张呈空泡状,线粒体肿胀、结构破坏,嵴紊乱、稀疏。4.流式细胞仪检测Siha细胞的凋亡率。体外培养的Siha细胞经药物作用后,细胞出现早期细胞凋亡、晚期细胞凋亡或者坏死。1.蜈蚣三七总苷药对Hep3B细胞抑制作用最强,对Siha细胞抑制作用次之、HepG2细胞抑制作用相对较弱。2.纯化蜈蚣三七总苷药对Siha细胞抑制作用较强,对Hep3B细胞抑制作用次之,HepG2细胞抑制作用相对较弱。3.齐墩果酸药对HepG2细胞抑制作用较强,Hep3B、HepG2细胞抑制作用相对较弱。4.蜈蚣三七总苷、纯化蜈蚣三七总苷对肿瘤细胞均有增殖抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。此结果对该药进一步的实验和临床应用具有指导意义。