基于稀土配合物的次氯酸荧光探针合成与生物成像应用

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在诸多发光(荧光/磷光)分子探针中,以稀土配合物(主要为Eu3+及Tb3+配合物)为发光团的探针具有发光寿命长、Stokes位移大、发射峰尖锐等特性,使其可与时间分辨荧光测定技术相结合,进而消除复杂生物样品成像测定时的背景荧光干扰。此外,由于具有组织穿透性强和空间分辨率高的优点,基于Gd3+配合物的磁共振成像技术已成为目前医学成像技术研究的另一热点。本学位论文的研究中设计合成了如下几种基于稀土配合物的次氯酸荧光探针,并考察了其在生物成像中的应用效果。基于次氯酸对β-二酮-Eu3+配合物的特异性荧光淬灭性质,设计制备了一种内包Tb3+配合物且表面修饰了四齿β-二酮-Eu3+配合物的硅胶基质比率型次氯酸纳米荧光探针RTLNP。该探针与次氯酸反应后,Eu3+配合物的红色荧光消失,而Tb3+配合物的绿色荧光保持不变,使得其可在时间分辨模式下用于次氯酸的比率型荧光检测。探针RTLNP具有选择性好、灵敏度高、荧光响应迅速等优点,被成功用于活体细胞、斑马鱼以及大型蚤体内次氯酸的比率型时间分辨荧光成像测定。通过在四齿β--二酮-Eu3+配合物BHHBCB-Eu3+中引入具有线粒体及溶酶体靶向定位作用的三苯基膦阳离子以及吗啉基团,设计合成了两种对线粒体及溶酶体内次氯酸具有特异性响应的Eu3+配合物荧光探针Mito-BHHBCB-Eu3+和lyso-BHHBCB-Eu3+。与商品化的线粒体或溶酶体荧光指示剂的双染色共聚焦细胞成像实验证明了探针的细胞器靶向定位性能(皮尔森系数分别为0.94和0.91)。基于两种探针,实现了活细胞线粒体和溶酶体内次氯酸的时间分辨荧光成像测定。将配体DPBT引入到二齿β-二酮-Eu3+配合物的结构中,合成了一种次氯酸荧光探针[Eu(L)3(DPBT)]。该探针不仅可在400 nm以上的可见光激发下发出Eu3+配合物的红色长寿命荧光,还具有优良的线粒体靶向定位性能,被成功用于活细胞线粒体内及小鼠体内次氯酸的荧光成像测定。此外,基于该探针制备了一种可用于小鼠皮肤伤口内次氯酸实时原位示踪的[Eu(L)3(DPBT)]掺杂水凝胶,实现了伤口炎症状况的实时评价。将配合物DOTA-Gd3+与BHHBCB-Eu3+共价偶联,设计合成了 一种具有亲水-疏水双亲性质的Gd3+-Eu3+双核配合物,并通过自组装的方法制备了基于该配合物的荧光-磁共振双模式响应型次氯酸纳米探针SADP。在充分考察探针用于活细胞内次氯酸的荧光-磁共振双模式检测性能的基础上,将该探针用于小鼠关节炎模型以及药物诱导肝损伤模型中次氯酸的检测,证明了该探针在炎症相关疾病诊断中的潜在应用价值。
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