流感嗜血杆菌可引起人类多种传染性疾病,其中最常见且最严重的是脑膜炎,其次是肺炎。根据主要毒力因子荚膜的有无,可将其分为两大类有荚膜型和无荚膜型。前者有a、b、c、d、e、f六个荚膜型别,其中b型最为流行,主要感染对象为儿童,几乎所有由Hi(Haemophilus influenzae, Hi)引起的脑膜炎病例和大多数其它菌血性病例均是感染b型菌所致。Hib是全球性的公共卫生问题,其发病率及死亡率高促使科学工作者不断研究如何用疫苗来预防Hib感染。自上世纪80年代Hib疫苗问世以来,目前全球已有九十多个国家在使用这一疫苗。在儿童免疫规划中常规接种疫苗的国家和地区,Hib所致疾病发病率迅速下降甚至消失。近年来人们发现Hib对氨苄青霉素和其它一些抗生素的耐药率增高,通过疫苗预防Hib疾病变得比以往更重要。首先制备了b型流感嗜血杆菌CMCC58534株的种子批,并进行了鉴定,然后对其进行扩大培养与发酵,之后通过甲醛杀菌、沉淀复合糖、去除核酸、沉淀粗糖、苯酚抽提去除蛋白、超滤去除苯酚、沉淀精糖等步骤对其荚膜多糖进行纯化。通过几批发酵培养与纯化,对其生产工艺进行了探讨与优化,最后确定发酵、纯化条件,在此条件下进行了连续三批100L发酵中试,得到的精糖产量均高于80mg/L,且精糖鉴别试验、化学检定、细菌内毒素检查均合格,核磁共振检测证明其结构正常。说明生产工艺稳定,能够得到合格的Hib多糖。CRM197(Cross reacting material197)是白喉毒素的一种突变体,它的第52位氨基酸由Gly突变为Glu,致使白喉毒素酶活性位点发生改变,从而不能对细胞产生毒性作用,但在抗原性和免疫原性上仍与天然的白喉毒素保持一致。目前国内以CRM197作为载体的结合疫苗有多种,这些结合疫苗与多糖疫苗相比具有优势,能够在成人,儿童和<2岁的儿童中诱导特异性免疫应答,且可以持续较长时间。本研究将白喉棒状杆菌基因组DNA片段插入pET43.1a表达质粒,成功构建了表达质粒。