论文部分内容阅读
蛭弧菌是一类专门以捕食细菌为生的小型寄生性细菌，它具有寄生和裂解细菌的生理特性，尤其是对许多致病性革兰氏阴性菌具有较强的裂解作用。本实验采用双层琼脂平板法以施氏假单胞菌作为宿主菌从上海市浦东新区泥城镇某中华鳖养殖池池水和上海市杨浦区复兴岛运河河水和淤泥样中筛选到了6株菌（分别命名为AS212，JS221，JS223，JS413，JS422和N322）。通过对这6株菌进行形态学观察，包括6株菌在双层琼脂平板上形成噬菌斑的形态和利用透射电子显微镜观察到的不同生活阶段的形态，对照《伯杰氏系统细菌学手册》（第二版），其噬菌斑形态和透射电镜下形态均符合蛭弧菌的典型特征。最后，对6株菌的16S rRNA基因进行扩增，将测序后所获得的序列与GenBank中与已有的相关序列进行比较，并对其进行系统进化分析。然后，我们选取了其中一株裂解能力较强的蛭弧菌AS212，研究其在不同盐度、温度和pH条件下的裂解效果和生长实验，测定了其对不同来源菌株的裂解谱，分析了其对养殖水体中细菌的消除作用，同时与水产养殖中常用消毒剂溴氯海因和三氯异氰尿酸进行对比。最后，通过AS212菌株在凡纳滨对虾幼体培育中模拟应用，测定了菌株AS212对凡纳滨对虾幼体培育水体中细菌数量的影响和蛭弧菌数量的变化，以及对水体pH、NH4+-N、NO3--N、NO2--N和凡纳滨对虾成活率的影响。本研究结果表明，这6株菌所形成的噬菌斑的形态均为圆形、透明、边缘整齐，透射电镜观测其形态为短杆状，端生单根鞭毛。从噬菌斑的形成、裂解特性和细菌形态来看，这6株菌属于蛭弧菌。对它们的16S rRNA基因序列分析和系统进化分析发现，菌株JS413为Bacteriovorax属，种未定；菌株N322为Bdellovibrio bacteriovorus；而菌株AS212、JS221、JS223和JS422与同源关系最近的Bdellovibrio sp. HEA（AY294216）相似性只有90%，它们与典型的蛭弧菌Bdellovibrio bacteriovorus HD100（TAJ292759）亲缘关系较远，相似性只有80%，有可能是Bdellovibrio属的一个新种，称其为蛭弧菌类生物更为合适。蛭弧菌AS212菌株的裂解能力结果表明，该菌株不仅能裂解大肠杆菌、嗜水气单胞菌、弧菌等革兰氏阴性菌，还能裂解无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌等革兰氏阳性菌；蛭弧菌AS212比溴氯海因和三氯异氰脲酸对消除养殖水体中细菌更有优势。AS212菌株在凡纳滨对虾幼体培育中模拟应用结果发现，添加蛭弧菌AS212后凡纳滨对虾幼体培育水体中细菌总数明显减少，蛭弧菌数量先行显著增加后下降，最终与水体中细菌形成一个动态平衡；AS212菌株对pH、NH4+-N、NO3--N、NO2--N影响均不明显，说明对凡纳滨对虾幼体培育过程中水质改善没有明显的作用；添加蛭弧菌AS212后能提高凡纳滨对虾幼体的成活率，说明对幼体具有一定的保护作用。