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艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)感染引起的获得性免疫缺陷综合征。据世界卫生组织WHO数据结果显示,从HIV传染病被发现到现在,其感染者已经超过了7千万人,截止2017年底,全球仍有3690万人携带艾滋病病毒,死亡人数超94万人.截止2017年6月,我国仍有HIV感染者718270人,其中死亡221628人。虽然目前高效的抗逆转录病毒治疗(Highly Active AntiretroViral Therapy,HAART)在HIV病毒控制方面表现突出,可以抑制病毒复制,使得病人的生命得以延长并正常生活,但抗逆转录病毒治疗(ART)的需要是终生的,在经济上可能难以维持。因此,HHIV疫苗的研发对攻克艾滋病至关重要。HIV-1病毒粒子表面的包膜糖蛋白(Envelope glycoprotein,Env)Env三聚体能够和受体结合介导病毒与宿主细胞进行膜融合,是抗体识别的唯一靶标,因而成为HIV疫苗研发的重要靶点。SOSIP,NFL2P等类天然Env三聚体改造方案的报道使得类天然Env三聚体在体外高效表达成为了可能,并且该三聚体抗原能在动物实验中激起较高的血清中和滴度。这些研究均为HIV疫苗研发提供了指导意义和新希望。本研究以Expi293F悬浮细胞为表达载体,通过SOSIP和NFL2P等设计方案得到BG505、JR-FL以及NL4-3三个型别的三聚体蛋白表达质粒,扩大了抗原库,为抗体筛选和抗原设计奠定了基础。通过引入并适当延长His-tag标签简化了蛋白纯化的条件并提高了蛋白的纯化效率和纯度,目前蛋白的产量保持在10mg/L左右。间接性ELISA反应验证了表达的三聚体蛋白与广谱中和抗体有较好的亲和能力,且在电镜下能看到其三聚体形态。以三聚体蛋白作为免疫原进行动物免疫,能在动物体内激起较高的血清中和滴度,说明该三聚体抗原具有良好的生物学活性和免疫原性,并保留了天然Env三聚体上面的中和表位。采用多型别gp140三聚体蛋白进行低剂量序贯免疫和混合免疫,筛选到三株具有交叉中和能力的抗体,表明多型别的Env三聚体蛋白低剂量免疫反复刺激动物免疫系统的免疫方式更有利于诱导产生广谱中和抗体,为HIV疫苗设计中抗原改造和抗体筛选方面奠定基础并提供一定的指导意义。