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前期研究表明TGF-β1、PDGF-B基因在LPS介导的小鼠乳腺上皮细胞(MECs)差异显著的上调,且小鼠MECs在LPS刺激下通过TLR4信号通路引起细胞分泌前炎症细胞因子而调节免疫和炎症,为了研究TGF-β1、PDGF-B基因在TLR4信号通路的作用,本研究采用siRNA转染技术对TGF-β1和PDGF-B基因进行沉默,用实时荧光定量RT-PCR方法筛选最佳转染条件,继续采用实时荧光定量RT-PCR方法分别检测它们沉默后LPS介导其下游信号Smad3和PI3K mRNA表达量,用ELISA方法检测其下游信号Smad3和PI3K蛋白含量,ELISA方法检测LPS介导细胞分泌前炎症细胞因子IL-6和TNF-α的量。实验结果显示:选用TGF-β1-mus-1212、PDGF-B-mus-886 siRNA转染片段50 nM、30 nM、20 nM浓度组都能极显著抑制TGF-β1和PDGF-B的mRNA表达(P<0.01),其中,TGF-β1-mus-1212片段、PDGF-B-mus-886片段的50 nM浓度下各转染抑制率分别最高。TGF-β1沉默后,LPS刺激下其下游信号Smad3mRNA表达量和细胞分泌量与LPS对照组相比呈显著性降低(P<0.05),细胞分泌TNF-α的量比LPS对照组显著降低(P<0.05),分泌IL-6的量各组无变化(P>0.05)。PDGF-B沉默后,LPS刺激下其下游PI3K的mRNA表达量与LPS对照组相比呈显著性降低(P<0.05),PI3K蛋白含量与LPS对照组相比有所降低,但差异不显著(P>0.05),细胞分泌IL-6的量与LPS对照组相比呈显著性降低(P<0.05),分泌TNF-α的量各组无变化(P>0.05)。结果提示:采用siRNA转染技术成功对TGF-β1、PDGF-B基因沉默;小鼠MECs中TGF-β1与Smad3有直接关系,TGF-β1能引起LPS介导的其下游信号Smad3表达和前炎症因子的分泌,它可能是小鼠MECs上TLR4信号通路中的关键基因;PDGF-B与PI3K有一定关系,PDGF-B可引起LPS介导的其下游信号PI3K表达和前炎症因子的分泌,但PI3K激活可能还有其他途径,PDGF-B可能是小鼠MECs上TLR4信号通路中的关键基因。因此,TGF-β1和PDGF-B基因可以作为靶基因进行更加深入的研究,能为乳腺炎症、肿瘤等乳腺相关疾病的治疗提供新的思路及实验数据,为新药的开发和应用提供理论依据。