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研究目的:通过建立A549-luc+人肺癌细胞荷瘤裸鼠模型以及KM小鼠化学致癌模型,在动物水平分别进行动物活体荧光显像、MRI显像以及HA-CLP/MIBI亲肿瘤SPECT显像进行肿瘤边界分析,同时通过对KM小鼠化学致癌模型的肿瘤边界瘤细胞生物行为的病理分析,对肺肿瘤影像学与病理学肿瘤边界进行初步关系的探讨,为肿瘤显像以及肿瘤放疗靶区的勾画提供实验依据。研究方法:1.HA-CLP的分离纯化和鉴定利用亲和层析法从牛鼻软骨分离纯化HA-CLP,通过环氧丙烷活化Sepharose 4B、HA-AH-Sepharose 4B亲和层析柱的制备对粗制品HA-CLP进行精制;对精制HA-CLP进行免疫印迹法分析HA-CLP分子量以及免疫原性分析为后续实验提供免疫学依据;HA-CLP氨基酸分析确定其氨基酸含量,为核素标记提供蛋白结构依据。2.A549-luc+人肺癌细胞荷瘤裸鼠模型与三重影像融合A549-luc+人肺癌细胞皮下接种BALB/C-nunu裸鼠,接种4周成瘤后分别进行动物活体荧光显像、MRI显像以及尾静脉注射99mTc-HA-CLP/99mTc-MIBI进行SPECT核素显像,通过影像融合对瘤体的解剖边界与功能边界进行分析。3.化学致癌模型小鼠影像学与病理细胞学分析利用8%的氨基甲酸己酯(乌拉坦)腹腔注射至KM小鼠,常规饲养180天后分别进行MRI显像和尾静脉注射99mTc-HA-CLP/99mTc-MIBI进行SPECT核素显像。同时将125I-HA-CLP于肿瘤模型小鼠尾静脉注射后0.5h、2h、4h以及24h进行肺癌冰冻切片放射性自显影,观察其放射显像边界以及放射强度并分析;然后将非标记HA-CLP于肿瘤模型小鼠尾静脉注射后0.5h、2h、4h以及24h进行石蜡切片,并对其进行ABC法(酶标记抗体法)免疫组织化学,观察并分析其肿瘤边界瘤细胞生物行为以及CLP对肿瘤边界的指示作用情况。研究结果:1.亲和层析法提取牛鼻软骨CLP。实验用牛鼻软骨10g,收获HA-CLP(241.8±63.4)mg (n=5)抽提蛋白率为2.42%;SDS-PAGE电泳后显示其具有两个组分,分别是(45.36±4.12)KD和(75±2.15)KD ;免疫印迹后观察,只有(75±2.15)KD具有HABP免疫原性,且随HA-CLP浓度增加而增强。HA-CLP氨基酸分析显示谷氨酸含量最高(1.58mg/20mg),酪氨酸含量(0.97mg/20mg),胱氨酸含量为(0.71mg/20mg)2.通过稳定表达萤火虫荧光素酶的A549人肺腺癌细胞肿瘤模型影像学对比进行三种影像学均能获得良好效果。经影像融合后观察99mTc-HA-CLP组三种影像重叠率为94±2.37%,而99mTc-MIBI组三种影像重叠率为93±3.54%(n=15),两者无显著差异(p>0.05)。99mTc-MIBI组肿瘤边界L/B值为2.01±0.04,在2h达到峰值;99mTc- HA-CLP组肿瘤边界L/B值为1.82±0.03,在4h达到峰值。99mTc-HA-CLP在不同荧光段落其L/B值更具线性关系且随荧光值的减少而减少。3.化学致癌KM小鼠原位肺肿瘤模型在核素显像以及MRI显像效果不显著。SPECT显像99mTc-HA-CLP L/B比值在2h达到峰值,99mTc-MIBI的L/B比值在4h达到峰值。肺肿瘤放射性自显影在2h显像清晰。免疫组织化学在2h能较清晰区分肿瘤边界,其HA-CLP免疫信号较强;肿瘤HA-CLP蛋白免疫印迹均在2h条带显示清晰。结论:1.实验提取物HA-CLP核心蛋白区域具有HABP抗原决定簇。其免疫反应性随浓度增大而增大。2.通过A549-luc+细胞裸鼠移植瘤模型对比影像分析,99mTc-HA-CLP和99mTc -MIBI均能很好提示肿瘤边界, 99mTc-HA-CLP在不同荧光段落其L/B值更具线性关系且随荧光值的减少而减少。在A549-luc+细胞裸鼠移植瘤模型中,99mTc-HA-CLP的诊断L/B阈值为1.82±0.03,99mTc-MIBI的诊断L/B阈值为2.01±0.04。3.化学致癌KM小鼠原位肺肿瘤模型HA-CLP在尾静脉注射2h后能较清晰的显示肿瘤以及其移行边界的所在位置。4.移植瘤模型在影像学探索肿瘤以及其边界上效果较显著;在免疫学和病理学上,则以化学致癌KM小鼠肿瘤模型在研究肿瘤细胞及其边界分布较好。