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目的分析2型糖尿病患者发生糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的危险因素,建立DR的风险预测模型并验证,为其预防和筛查提供科学依据;针对晚期严重增殖期糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)行玻璃体切割术患者,术前玻璃体腔注射雷珠单抗后观察玻璃体蛋白谱的表达变化,揭示雷珠单抗的作用机制。方法(1)回顾性分析2008年1月至2016年12月间我院眼科及内分泌科门诊及病房收治的2型糖尿病患者病例资料4291例,收集内容包括:性别、年龄、糖尿病病程、身高、体重、腰围、收缩压、舒张压。生化指标包括:肌酐、尿素、尿酸、血电解质(钾、钠、氯、钙、镁)、空腹血糖、OGTT 2h血糖、空腹胰岛素、OGTT 2h胰岛素、空腹C肽、OGTT 2h C肽、糖化血红蛋白、糖化白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、24h尿蛋白定量。所有入组患者按照9:1的比例随机分为模型组3861例和验证组430例。依照2002年DR国际临床分级标准将所有患者分为无糖尿病视网膜病变(non-diabetic retinopathy,NDR)和DR。模型组应用多因素logistic回归分析筛选DR发生的独立危险因素,建立DR风险预测模型。验证组患者数据带入模型,评估模型的预测效力。(2)收集6名晚期严重增殖期糖尿病视网膜病变患者,玻璃体腔注射雷珠单抗术前和术后玻璃体标本,采用TMT标记联合LC-MS/MS的蛋白质组学技术对玻璃体液蛋白质组进行分析,鉴定筛选差异蛋白。利用DAVID、metascape和String等在线数据库对差异蛋白进行GO注释、Reactome通路注释和蛋白质相互作用分析。酶联免疫吸附试验(ELISA)验证lumican、ITIH1和CHI3L1的蛋白表达水平。结果(1)DR风险预测模型纳入指标为:年龄(-4~0分)、糖尿病病程(0~13分)、收缩压(0~7分)、尿素(0~3分)、氯(0~5分)、镁(-3~0分)、OGTT 2h C肽(-6~0分)和24h尿蛋白定量(0~11分),评分范围-13~39分。诊断切点11.5分,此时敏感度66.9%,特异度66.6%,ROC曲线下面积0.722(0.701~0.744)。验证组敏感度63.8%,特异度64.8%,ROC曲线下面积0.683(0.615-0.751)(2)雷珠单抗注射后PDR患者玻璃体同注射前PDR患者玻璃体之间共鉴定出36种差异蛋白,其中35种表达上调,1种表达下调。GO注释显示差异蛋白主要表现为结合功能,主要参与蛋白激活级联、内肽酶活性负调节、凝血等生物过程。Reactome通路分析显示差异蛋白主要参与补体系统激活、凝血级联激活、免疫调节、血小板脱颗粒等。ELISA结果显示雷珠单抗注射后PDR患者玻璃体液中lumican、ITIH1浓度升高,CHI3L1浓度降低。结论(1)年龄、糖尿病病程、收缩压、尿素、氯、镁、OGTT 2h C肽和24h尿蛋白水平是DR相关的危险因素,本研究基于上述危险因素构建的DR风险预测模型具有一定的预测效力,可以为DR的预防和筛查提供科学依据。(2)雷珠单抗干扰前后PDR患者玻璃体蛋白质表达谱发生了改变,差异蛋白功能涉及补体系统激活、凝血级联激活、免疫调节、血小板脱颗粒等。Lumican、ITIH1在雷珠单抗注射后浓度上升,CHI3L1在雷珠单抗注射后浓度下降,提示雷珠单抗可能通过对三种蛋白的调节参与了视网膜炎症、血管新生及神经保护方面的作用。