【摘 要】
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目的:（1）研究白藜芦醇对角膜碱烧伤后的角膜溶解、氧化应激、新生血管、炎性浸润的作用;（2）探讨白藜芦醇是否通过SIRT1/FOXO3a通路发挥保护作用。方法:（1）选取健康雄性C57BL/6小鼠,通过计算机完全随机分组法分为三组:正常对照组、角膜碱烧伤组（AB/模型组）以及角膜碱烧伤后给与白藜芦醇组（AB+RES/实验组）。正常对照组共计22只,其他两组每组33只。（2）每只小鼠用10%水合氯醛
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目的:（1）研究白藜芦醇对角膜碱烧伤后的角膜溶解、氧化应激、新生血管、炎性浸润的作用;（2）探讨白藜芦醇是否通过SIRT1/FOXO3a通路发挥保护作用。方法:（1）选取健康雄性C57BL/6小鼠,通过计算机完全随机分组法分为三组:正常对照组、角膜碱烧伤组（AB/模型组）以及角膜碱烧伤后给与白藜芦醇组（AB+RES/实验组）。正常对照组共计22只,其他两组每组33只。（2）每只小鼠用10%水合氯醛（4ml/kg）腹腔麻醉。显微无齿镊夹起预先浸泡在氢氧化钠溶液中的单层滤纸片,轻轻贴放在除对照组以外的所有小鼠角膜中心,40s后用流动的0.9%的氯化钠水溶液冲洗;在碱烧伤前1天及碱烧伤后每天,给予实验组小鼠腹腔注射30mg/kg的白藜芦醇,直到处死小鼠,同时对照组和模型组小鼠腹腔注射20%的乙醇。造模成功的所有小鼠,统一规范地用氧氟沙星滴眼液滴眼,4次/d,1滴/次,氯霉素眼膏涂眼,3次/d,1滴/次,连续用药至第3d,以防止感染。（3）分别于实验安排的1、3、7天对各组小鼠采用荧光素钠试纸染色,然后在显微镜下观查角膜溶解面积,并在钴蓝光下拍摄记录;碱烧伤后1d、3d和7d的每个时间节点,随机地选取模型组和实验组3只小鼠,对照组2只小鼠,采用颈椎脱臼法处死后,立即解剖小鼠眼球取角膜,采用Western blot免疫印迹实验检测SIRT1/FOXO3a通路相关蛋白;ELISA法检测MDA,SOD的表达情况;通过实时PCR技术分析VEGF、IL-1β、IL-6的表达情况。第3天的小鼠角膜进行冰冻切片,HE染色观察新生血管;14天的小鼠角膜新生血管在显微镜下拍照并行FITC-右旋糖酐血管造影后计算角膜新生血管的面积。结果:角膜荧光素钠染色图像结果显示角膜碱烧伤组较角膜碱烧伤后给予白藜芦醇组角膜愈合慢。ELISA法示AB+RES组的MDA表达低于AB组、SOD表达高于AB组。蛋白质印迹试验示AB组SIRT1蛋白表达水平低于正常对照组,FOXO3a及磷酸化FOXO3a低于对照组。q PCR法示AB组VEGF、IL-1β、IL-6高于正常水平,给予白藜芦醇处理后显著改善了这种差异。HE染色观察显示,与AB+RSV组相比,AB组角膜基质层结构较紊乱。显微镜下角膜拍照和角膜血管造影表明白藜芦醇能明显降低因碱烧伤所诱导的角膜新生血管。结论:1、白藜芦醇显著改善了碱烧伤后小鼠角膜的溶解、氧化应激、炎症反应和角膜新生血管的形成;2、角膜碱烧伤后小鼠角膜SIRT1被抑制、p-FOXO3a发生下调,应用白藜芦醇则上调了SIRT1、p-FOXO3a的表达,提示白藜芦醇可能通过SIRT1/FOXO3a通路改善了碱烧伤后角膜的氧化应激、炎症反应和新生血管的生成。
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