沙冬青NAC转录因子基因AmNTL1和AmNAC6的克隆与功能分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:liuxing_001
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NAC(NAM、ATAF和CUC)转录因子家族是植物所特有的一类转录调控蛋白,在植物的器官形成、激素调控和抵抗生物与非生物胁迫中起重要作用。沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)是分布在中亚荒漠区的唯一常绿阔叶植物,对于严寒和干旱等恶劣环境有着很强的耐受性。本研究从该植物中克隆到两个NAC蛋白基因AmNTL1和AmNAC6,并对其抗逆功能进行了分析。主要研究结果简介如下:(1)AmNTL1的编码蛋白含533个氨基酸残基,在其氨基酸序列的N端含有一个保守的NAC结构域,C端区域为转录激活区,在靠近C-末端还有一个跨膜基序。(2)亚细胞定位分析表明,AmNTL1蛋白可能定位于细胞质膜。在酵母自激活体系中,AmNTL1蛋白具有转录激活活性。(3)在室内培养的沙冬青幼苗中,AmNTL1的转录水平受低温和盐胁迫诱导而上调,在高温胁迫下则呈降低趋势;在干旱处理早期其转录水平高于对照,之后回落至对照水平。在野外生长的沙冬青植株嫩叶中,该基因的转录水平在1~4月较高,5、6月较低,其他月份居中;在不同器官中,其转录水平在侧根、嫩叶和花蕾中较高,而在嫩枝和未成熟果荚中较低。(4)将AmNTL将在拟南芥中组成型表达,可明显提高转基因株系的抗冻、抗冷性、耐盐性和对外源ABA的敏感性,并可增强对渗透胁迫的耐性。此外,转基因株系细胞膜和叶绿素的稳定性及抗氧化胁迫能力均高于野生型。(5)AmNAC6的编码蛋白含304个氨基酸残基,由N端NAC结构域(含两个核定位信号)与C端转录激活区组成,亚细胞定位实验显示其分布于细胞核中。(6)在室内培养的沙冬青幼苗中,AmNAC6的转录水平主要受干旱诱导而上调,在低温、高温和高盐胁迫下则呈现上、下调交替出现的变化趋势。在野外生长的沙冬青嫩叶中,其表达量在全年绝大多数月份间无明显变化;在不同器官中,则以嫩叶中的表达量较低。
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