论文部分内容阅读
多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)是较常见的自身免疫性疾病,发病过程中CD4~+T细胞发挥重要作用,Th17/Treg细胞数量和功能失衡,但具体发病机制尚不完全清楚。研究发现,lncRNA AK124826在PM/DM患者CD4~+T细胞中高表达,IL-27在PM/DM患者中低表达,芯片网络调控图预测IL-27是lncRNA AK124826的作用靶点。在此基础上提出假说:lncRNA AK124826通过靶基因IL-27影响Th17/Treg平衡,参与PM/DM的发病。我们首先观察lncRNA AK124826在PM/DM患者中的表达特点;其次,采用慢病毒过表达和干扰技术研究lncRNA AK124826对PM/DM患者Th17/Treg细胞分化的作用机制;第三,预测IL-27是lncRNA AK124826的功能靶点。本课题为治疗PM/DM提供新的思路。【目的】探讨lncRNA AK124826通过靶基因IL-27,实现对Th17/Treg细胞平衡的调控作用,从而参与PM/DM发生发展。【方法】采用荧光定量PCR检测实验组、对照组外周血CD4~+T细胞lncRNA AK124826、IL-17和FoxP3基因的表达,流式细胞术检测外周血CD4~+T细胞中Th17和Treg细胞百分比;应用ELISA法检测各研究组血清中IL-17、TGF-β、肌酸激酶(CK)和IL-27的表达情况。lncRNAAK124826慢病毒过表达载体或RNAi慢病毒干扰载体转入PM/DM患者外周血初始CD4~+CD45RA~+T细胞,用IL-6、TGF-β、PM/DM自身抗原Jo-1共刺激,进行分化培养,流式细胞术检测Th17和Treg细胞的表达;Western-blot检测lncRNA AK124826慢病毒过表达和干扰对信号通路JAK-STAT和MAPK/P38的影响。【结果】与健康对照组相比,PM/DM患者TGF-β和CK表达显著升高(P<0.01),lncRNA AK124826表达显著升高(P<0.01),同时,IL-17的基因表达显著升高(P<0.01),而FoxP3的基因表达显著下降(P<0.01)。PM/DM患者外周血CD4+T细胞中Th17细胞百分比是(3.24±1.47)%,显著高于健康对照组的(0.82±0.24)%(P<0.01),PM/DM患者外周血CD4~+T细胞Treg细胞百分比是(3.27±0.45)%,显著低于对照组的(6.78±0.92)%(P<0.01);PM/DM患者外周血IL-27的表达达水平为13.42±3.73 pg/ml,显著低于健康对照者的36.3±8.09 pg/ml(P<0.01);lncRNA AK124826过表达组Th17细胞比例显著增加,同时Treg细胞显著减少;而降低lncRNAAK124826的表达后,Th17细胞的比例显著降低,Treg细胞显著增加。【结论】在PM/DM患者中,lncRNA AK124826表达显著增加,对Th17/Treg细胞的分化起调控作用,促进CD4~+CD45RA~+T细胞向Th17细胞分化,抑制其向Treg细胞分化。通过该机制参与了PM/DM的发生发展。