论文部分内容阅读
研究背景:糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是一种严重的眼科疾病,是糖尿病中主要的并发症之一,该疾病主要的特征是视网膜微血管功能障碍,最严重的后果是导致失明,是导致糖尿病患者视力丧失的主要因素。MicroRNA(miRNA)是非编码单链微小RNA分子,约为21-24个核苷酸的长度,大量研究表明循环mi RNAs是一类具有临床诊断价值的新型生物标志物,目前已有许多循环mi RNAs用于疾病诊断生物标志物研究的成功案例,而循环mi RNAs与糖尿病性非增殖性视网膜病变发生发展关系尚未明确。目的:获取在2型糖尿病非增殖性视网膜病变(non-proliferative diabetic retinopathy,NPDR)发展进程中差异表达的循环mi RNAs,大样本验证筛选出来的循环mi RNAs,通过(Receiver operating characteristic curve,ROC)曲线预测循环mi RNAs对2型糖尿病非增殖性视网膜病变的诊断价值,为合理评价循环mi RNAs作为2型糖尿病非增殖性视网膜病变诊断与治疗的生物标志物提供可靠的依据。方法:本研究所有样本都是来自深圳市南山区慢性病防治院,其中健康组血清样本144例、糖尿病前期(prediabetic)组血清样本70例、2型糖尿病(type2 diabetes mellitus,T2DM)血清样本117例及2型糖尿病非增殖性视网膜病变血清样本75例,2型糖尿病非增殖性视网膜病变经眼底荧光血管造影检查证实。首先运用基因芯片技术初步筛选健康组、糖尿病前期组、2型糖尿病组及2型糖尿病非增殖性视网膜病变组中血清mi RNAs表达谱,每组分别提供样本5例,根据芯片结果筛选出表达差异明显、可能与2型糖尿病非增殖性视网膜病变的进展相关的循环mi RNAs,并采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRTPCR)技术对不同阶段差异表达显著的循环mi RNAs进一步扩大样本验证,以寻找与2型糖尿病非增殖性视网膜病变疾病发展进程相关的循环mi RNAs。结果:通过对芯片检测结果进行筛选,最终发现在2型糖尿病非增殖性视网膜病变组及2型糖尿病组中有4个miRNAs(miR-3197、miR-2116-5P、miR-3939、miR-1910-3P)表达差异显著,而在糖尿病前期组、健康组及2型糖尿病组间未发现有表达差异明显的mi RNAs。进一步运用q RT-PCR技术扩大样本量进行验证,结果显示miR-3197和miR-2116-5P在2型糖尿病非增殖性视网膜病变组中的表达水平明显比2型糖尿病组高,P值小于0.001,有统计学意义,且受试者工作特征ROC曲线下面积(Area under curve,AUC)分别为0.967和0.760。结论:循环miR-2116-5p及循环miR-3197在2型糖尿病非增殖性视网膜病变患者中表达水平明显高于2型糖尿病组,与芯片结果一致,提示循环miR-2116-5p及循环miR-3197有望作为2型糖尿病非增殖性视网膜病变早期诊断的生物标志物。