STAT3,即信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription3),是信号转导和转录激活因子家族的成员,也是一种急性时相反应因子和核转录因子。STAT3存在于细胞浆内,被激活后能传导细胞所接收的外源信号,并且能够跨过细胞核膜结合到相应的DNA序列上,将外源信号所携带的信息通过改变对应基因的表达所表现出来。胃癌的发生是由多基因,多因素共同参与的多步骤过程。虽然近年来胃癌的发生率居高不下,但是胃癌发病的具体分子机制还不太清楚。现已检测到,STAT3在多种恶性肿瘤中存在活化形式,如白血病,头颈部鳞状细胞癌,恶性胶质瘤,乳腺癌,结直肠癌,肺癌,恶性黑色素瘤,宫颈癌等。因此,本研究认为,STAT3在胃癌的发生发展过程中也起到了重要的作用。肿瘤是由组织细胞异常转化,分化障碍和大量增殖而形成的。STAT3可以促进肿瘤细胞的增殖。STAT3因第705位点的酪氨酸残基磷酸化而活化,第727位的丝酸残基磷酸化可以提高STAT3蛋白与目的基因的结合能力。使用siRNA干扰人STAT3mRNA表达可以降低由于IL-6所引起的人HIF1-α蛋白的增加STAT3还可以通过抑制肿瘤细胞的凋亡从而促进肿瘤细胞的增殖。在前列腺癌中,STAT3表达降低下调BCL-2和PCNA的表达,上调CASPASE-3的表达。胃癌组织免疫组化实验结果证实,STAT3的表达与SURVIVIN的表达相关。在乳腺癌中,STAT3结合到P53启动子上抑制其转录。目的：本研究通过采用构建真核表达质粒,并将其转染进入体外培养的胃癌细胞株的方法,观察在目的基因STAT3表达升高的情况下,对胃癌细胞株的生长状况的影响,以期初步探索STAT3在胃癌发生发展过程中所起的作用。方法：1.载体构建采用PCR法扩增人STAT3基因序列,与载体pcDNA3连接,转化至宿主菌DH5a,筛选抗氨苄青霉素阳性克隆,提取质粒并鉴定。2.转染采用阳离子脂质体法转染胃癌细胞株MGC803(P53基因野生型),实验分为3组,即空白对照组(转染脂质体),空载体组(转染pcDNA3)和重组质粒组(转染pcDNA3-STAT3)。3.胃癌细胞中蛋白和mRNA的表达水平转染48小时之后,提取总蛋白和总RNA,采用WESTERN BLOTTING和RT-PCR的方法检测STAT3, P-STAT3(Y705),P-STAT3(S727), HIF-1α,BCL-2,SURVIVIN,P53,CASPASE-3,PCNA在胃癌细胞株MGC803的蛋白和mRNA水平的表达情况。4.胃癌细胞增殖水平转染24h,48h,72h后采用CCK-8法检测胃癌细胞株MGC803的增殖情况。结果：1.成功构建重组质粒pcDNA3-STAT3琼脂糖凝胶电泳结果显示重组质粒pcDNA3-STAT3分子量约为7.6KB, HINDIII和XHO Ⅰ双酶切片段以及PCR产物分子量约为2.3KB。经测序验证,重组质粒插入的序列与所设计的寡核苷酸片段完全符合。2.胃癌细胞中目的基因STAT3在蛋白和mRNA水平均超表达WESTERN BLOTTING和RT-PCR结果显示,在胃癌细胞株MGC803中,与空白对照组和转染空载体组相比,转染重组质粒组目的基因STAT3的蛋白和(?)nRNA表达水平均升高(P<0.05)。3.胃癌细胞增殖水平CCK-8实验结果证实,与空白对照组和转染空载体组相比,转染重组质粒促进胃癌细胞株MGC803的增殖。WESTERN BLOTTING和RT-PCR结果显示,在胃癌细胞株MGC803中,与空白对照组和转染空载体组相比,转染重组质粒组P-STAT3(Y705), P-STAT3(S727), HIF-1α, BCL-2, SURVIVIN, PCNA表达水平均上调,P53, CASPASE-3表达水平均下调。结论：在胃癌细胞株MGC803中,利用构建的真核表达载体pcDNA3-STAT3可以有效的提高目的基因STAT3的表达,并且能够通过上调P-STAT3(Y705), P-STAT3(S727), HIF-1α, BCL-2, SURVIVIN, PCNA等基因的表达从而显著促进胃癌细胞的增殖,下调P53, CASPASE-3等基因的表达从而抑制胃癌细胞的凋亡,为进一步研究STAT3基因调控体外培养的胃癌细胞的机制提供实验基础。