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第一部分PHD抑制剂治疗非透析CKD患者贫血的有效性及安全性评估目的：贫血是慢性肾脏病(CKD)患者常见的并发症,静脉注射的促红细胞生成素存在一定的使用限制及不良反应。这部分研究的目的是通过随机对照、双盲的临床试验评估口服脯氨酸羟化酶(PHD)抑制剂在非透析CKD患者中改善贫血的疗效及其安全性,并观察治疗过程中其他实验室参数的变化情况。方法：筛选15名非透析CKD患者进行PHD抑制剂的随机、双盲、安慰剂对照的临床试验。受试者按照2：1的比例随机分配接受PHD抑制剂FG-4592或安慰剂,治疗期维持八周,治疗后随访期三周。根据治疗后血红蛋白(Hb)的反应调整用药剂量。治疗阶段受试者每周进行一次研究访视,记录受试者一般情况、有无不良反应、Hb、红细胞比容(Hct)等资料；定期随访网织红细胞(Rtc)、铁代谢参数及血脂等实验室指标。试验的主要终点是至第8周时Hb与基线相比的改变,次要终点为Hct、铁代谢参数及血脂等指标的变化情况。安全性评估包括针对不良事件、严重不良事件、心血管不良事件和实验室检查值与基线值相比变化有显著临床意义的受试者人数(%)。结果：两组间基线特征平衡良好。经过八周治疗后,试验组Hb平均值为11.1±1.1g/dL,安慰剂组Hb平均值为9.1±0.8g/dL,P=0.004；试验组Hct平均值为37.7±3.9%,安慰剂组Hct平均值为29.2±2.6%,P=0.001；试验组第4周Rtc平均值为1.7±0.7%,安慰剂组第4周Rtc平均值为1.4±0.6%,P=0.409,两组Rtc的升高值分别为0.7±0.7%与-0.1±0.6%,P=0.042；试验组胆固醇平均值为3.8±1.2mmol/L,安慰剂组胆固醇平均值为5.4±1.0mmol/L,P=0.024;试验组LDL-C平均值为2.4±0.9mmol/L,安慰剂组LDL-C平均值为3.5±1.0mmol/L,P=0.040;试验组转铁蛋白饱和度平均值为16.8±6.7%,安慰剂组转铁蛋白饱和度平均值为26.9±5.9%,P=0.013；试验组总铁结合力平均值为62.2±15.2μ mol/L,安慰剂组总铁结合力平均值为41.5±4.6mmol/L,P=0.012;试验组转铁蛋白平均值为40.5±10.5μ mol/L,安慰剂组转铁蛋白平均值为27.3±3.2μ mmol/L,P=0.018;试验组铁蛋白平均值为85.0±118.1μ g/L,安慰剂组铁蛋白平均值为272.2±91.1u g/L,P=0.009；试验组可溶性转铁蛋白受体平均值为6.1±2.1mg/L,安慰剂组可溶性转铁蛋白受体平均值为3.4±1.4mg/L,P=0.024。以上参数治疗期后两组间均呈现统计学差异。治疗及治疗后随访期间无严重不良事件及心血管不良事件的发生,试验组的各受试者均无明显实验室检查值的变化。结论：PHD抑制剂能够显著提高非透析CKD受试者的Hb、Hct等红系生成的指标,并可改善铁代谢及血脂的实验室参数,在两个多月的治疗随访期间无明显不安全事件发生。第二部分缺氧诱导因子通过下游miRNAs对相关靶基因调控机制的初探目的：通过miRNA芯片筛选与缺氧诱导因子(HIF)相关的差异表达miRNAs及下游靶基因,旨在探寻HIF对其下游因子调控的机制。方法：将第一部分试验组与安慰剂组受试者治疗后的血浆作为标本,经RNA质检后进行荧光标记。采用安捷伦人类1miRNA芯片进行杂交试验,获得miRNA表达谱；以GeneSpring软件和Quantile算法分析芯片实验数据,筛选与HIF相关的差异miRNAs。基于Sanger数据库预测差异1niRNA靶基因,基于Gene Ontology数据库进行GO注释,基于BIOCARTA及KEGG数据库进行Pathway注释。结果：获得符合基因芯片实验质量标准的RNA样品,基因芯片杂交及数据分析共鉴定到1347个miRNAs,得到两组间差异表达miRNA34个(差异倍数,Fold Change,FC≥2或≤0.5),其中上调的1miRNA29个,下调的miRNA5个。TargetScan数据库靶基因预测共得到1527条靶基因,主要涉及信号转导、物质结合、增殖与凋亡、免疫系统、代谢过程等。靶基因信号通路主要包括胰岛素/胰岛素样生长因子信号通路、MAPK信号途径、VEGF信号通路、凋亡途径、红系生成分化途径、脂质代谢途径等。其中,miR1202与miR1825共同的靶基因ABCAl,miR1825的靶基因ACACA, miR1280的靶基因FASN, miR92a的靶基因ACOX1和miR223的靶基因ACSL3与体内脂质代谢相关。经过分析,认为HIF表达增多后可使以上miRNA上调,从而抑制其下游靶基因功能,导致细胞内脂质沉积,脂质外流障碍。结论：HIF可通过调节miRNA的表达来间接调控靶基因的功能。在脂质代谢中,HIF或可通过miRNA及其下游靶基因发挥调节作用。