TGFβ<,2>特异性siRNA质粒对人Tenon's囊成纤维细胞增殖及功能的影响

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhongyi02w
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[目的]青光眼滤过性手术是目前治疗青光眼的主要手段,但术后滤过泡瘢痕化往往会导致手术的失败。在眼部,TGF-β2是参与创伤愈合和纤维化的重要调控因子,在滤过泡的纤维化过程中发挥了重要的调控作用。本实验应用干扰RNA方法抑制人胚胎眼Tenons囊成纤维细胞(HFTF)内TGF-β2的表达,以确定该方法能否抑制青光眼滤过术后滤过泡的瘢痕化,从而提高手术成功率。 [方法]将干扰RNA质粒p932-siTGFβ2用脂质体转染入HFTF后,分别采用WesternBlotting和免疫荧光方法对TGF-β2蛋白表达进行检测,并用Real-timeRT-PCR方法对TGF-β2mRNA进行检测。进而,又采用WesternBlotting和免疫荧光方法对Collagen蛋白表达进行检测,并采用MTT法检测和观察抑制TGF-β2蛋白表达后对细胞增殖和迁移功能的影响。 [结果]干扰RNA质粒p932-siTGFβ2转染入HFTF24h后,可降低TGF-β2mRNA表达量约47.5%,同时采用WesternBlotting方法检测发现抑制TGF-β2蛋白的表达具有时间依赖性,即转染后24h抑制效果最明显,48h后也有部分抑制作用,72h后抑制效果消失。HFTF转染质粒p932-siTGFβ224h后,还可同时抑制CollagenⅠ的合成、分泌,并抑制HFTF细胞的增殖和迁移的生物学行为。 [结论]采用干扰RNA方法可在体外实验中有效地抑制HFTF细胞内TGF-β2蛋白的表达,进而影响其生理功能,抑制细胞增殖、迁移和胶原蛋白的分泌、合成,从而可能会有效地抑制创伤的瘢痕化。采用干扰RNA方法抑制TGF-β2的表达是一种潜在预防术后创口瘢痕化、滤过泡纤维化的有效途径。
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