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实验背景:同种异体肾移植术是目前治疗终末期肾病的首选治疗方案,为广大终末期肾病患者带来了希望。肾移植术后抗体介导的排斥反应（Antibody-Mediated rejection,ABMR）是影响移植肾功能并最终导致移植肾失功的主要原因。随着临床检验技术的发展,术前人类白细胞抗原（Human leukocyte antigen,HLA）配型减少了HLA介导的细胞性排斥反应及HLA抗体介导的体液性排斥反应的发生,术前群体反应性抗体（Panel reactive antibodies,PRA）检测及补体依赖细胞毒性试验（Complement-dependent lymphocytotoxicity,CDC）能够早期诊断患者的致敏状态,减少了超急性及急性加速性排斥反应的发生,免疫抑制剂药物的研发及免疫抑制方案的优化改善了细胞介导排斥反应的治疗效果,这些都提高了移植物的短期存活率。然而移植肾的长期存活率并未得到显著改善。研究表明,大多数移植肾失功与抗体介导的移植肾排斥反应相关,除了HLA抗体在移植肾排斥反应中的作用外,近年来非HLA抗体介导的移植肾排斥反应越来越受到关注。从临床经验来看,肾移植术后抗体介导排斥反应与T细胞介导排斥反应相比较,具有救治困难、预后差且容易复发的特点,目前已成为器官移植领域亟待攻克的重点和难点。非HLA抗体的种类非常繁多,目前在肾移植领域有多种非HLA抗体被报道。有些非HLA抗体,如甲状腺球蛋白（Thyroglobulin,TG）抗体在心脏移植领域被报道过,但在肾脏移植领域未被报道过。临床上,在肾移植领域并未建立完善的非HLA抗体检测体系,尚不能通过血清非HLA抗体的情况对活动性抗体介导排斥反应进行预防性术前检测及辅助术后的诊治。实验目的:分析肾移植术后发生活动性ABMR且群体反应性抗体阴性患者血清中非HLA抗体的情况,筛选出与肾移植术后活动性ABMR的发生具有相关性并有预测价值的非HLA抗体,为临床上开展非HLA抗体的筛查提供理论依据;通过免疫组织化学染色,检测相关非HLA抗原在移植肾组织中的表达情况,从而为研究移植肾中非HLA抗体的作用机制提供实验基础。实验方法:回顾性分析2018年1月1日至2021年6月30日于吉林大学第一医院泌尿外二科因肌酐异常行移植肾穿刺病理活检患者的临床资料,对移植肾穿刺组织进行病理诊断（病理诊断依据Banff-2017移植肾病理分类方案）。根据纳入标准,最终ABMR组纳入26例术后发生经病理证实的活动性ABMR,且发生排斥时PRA为阴性的患者,对照组纳入19例因肌酐异常行移植肾穿刺活检病理提示无排斥反应的患者。收集两组患者的一般资料、肾移植术前、术后的血清学样本及移植肾穿刺病理组织样本。通过Luminex法对血清中60种非HLA抗体（既往报道与器官移植相关,包括但不局限于肾移植领域）进行检测,对两组患者血清中各非HLA抗体阳性个数及荧光中位值（Median fluorescent intensity,MFI）进行差异性分析,采用单因素分析法筛选出与活动性ABMR发生具有相关性的阳性表达的非HLA抗体,通过对移植肾组织相关非HLA抗原的免疫组化染色,比较两组移植肾中非HLA抗原的表达及分布差异,绘制ROC曲线评估筛选出的非HLA抗体对活动性ABMR发生的预测价值。实验结果:（1）对两组患者的一般资料进行统计分析（包含年龄,性别,穿刺时间,移植次数,免疫抑制剂,二线用药方案,术前诱导,术前PRA检测结果,术后PRA检测结果,透析时长,透析方式,BMI,移植类型）,ABMR组和对照组患者所有指标均未见统计学差异（P＞0.05）。（2）比较Luminex法测定的两组患者术前、术后血清中阳性的非HLA抗体个数,发现ABMR组患者术前、术后血清中非HLA抗体的阳性个数均多于对照组（P＜0.05）。（3）对所有非HLA抗体的荧光中位值进行差异性分析,发现与对照组相比,ABMR组中术前6种抗体的MFI显著升高（P＜0.05）,包括PRKCH、PRKCZ、ATP5B、SSB、SNRPB2和STAT6抗体,术后有9种抗体的MFI显著升高（P＜0.05）,包括CSF2、ATP5B、LPHN1、PECR、CCP、STAT6、SSB、NCL和PRKCZ抗体。（4）采用单因素分析法筛选出4种与活动性ABMR发生具有显著相关性的非HLA抗体（P＜0.05）,即CSF2、CCP、SSB和Thyroglobulin抗体,其中后3种抗体既往在肾移植领域未见报道;研究还发现9种与活动性ABMR发生具有潜在相关性的抗体,包括CXCL9、P2RY11、PRKCZ、胶原I、胶原V、NCL、PTPRO、STAT6和VIM,有待扩大样本量进一步明确。（5）组织病理学染色证实了活动性ABMR的移植肾组织表达更多的CSF2和Thyroglobulin抗原。（6）筛选出的CSF2、CCP、SSB和Thyroglobulin抗体对术后活动性ABMR的发生具有一定的预测作用。结论:（1）ABMR组患者肾移植术前与对照组患者肾移植术前相比较,血清中含有较多个数的阳性非HLA抗体,且PRKCH、ATP5B、SSB等6种非HLA抗体呈现较高表达。（2）ABMR组患者肾移植术后与对照组患者肾移植术后相比较,血清中含有较多个数的阳性非HLA抗体,且CSF2、SSB、CCP等9种非HLA抗体呈现较高表达。（3）CCP、SSB、CSF2和TG 4种非HLA抗体与肾移植术后活动性ABMR发生具有显著相关性,且这4种非HLA抗体对肾移植术后活动性ABMR的发生具有一定的预测价值。（4）CSF2和TG抗原在ABMR组患者移植肾组织中呈现较高表达。