目的在前期研究的基础上,观察清湿化瘀代表方内异康复片对子宫腺肌病(AM)模型小鼠子宫内膜PTEN、p-p65的表达水平的影响,探究清湿化瘀法对AM雌激素效应相关因子的作用机制。方法运用同种异体垂体移植子宫腔的造模方法,选取8周龄的ICR小处鼠制作子宫腺肌病模型。将已手术造模的小鼠随机分为内异康复片(NYKFP)高、中、低剂量组,丹莪妇康煎膏组(DEFKJG,中药对照药物),孕三烯酮组(GES,西药对照药物),3月模型组,6月模型组,另设置假手术组、正常组饲养3个月后,将3月模型组、正常组、假手术组鼠分别平均在间情期与动情期处死并采取标本。6月模型组继续常规饲养,余小鼠在常规饲养的基础上给予灌胃相应药物,3个月后分别平均在动情期和间情期处死并采取标本。运用免疫组化技术检测各组小鼠PTEN、p-p65表达水平,通过HE染色、病理切片观察造模前后及各组用药前后子宫腺肌病的病理改变,并对AM严重程度进行分级评分。结果1.从病理切片判断内膜组织侵润到肌层情况,同时根据AM发展水平分级评分,并统计分析。假手术组与正常组比较差别无统计学意义(P>0.05),而3月模型组和6月模型组的评分均明显高于正常组,有统计学意义(P<0.01),且6月模型组高于3月模型组(P>0.05)。2.雌激素效应因子PTEN、p-p65在正常组及假手术组中的表达差别无统计学差异(P>0.05),模型组小鼠p-p65的表达随病程进展逐渐升高,6月模型组和3月模型组明显高于假手术组及正常组(P<0.01),且6月模型组高于3月模型组(P<0.01)。而PTEN的表达水平随病程发展而降低,6月模型组和3月模型组显著低于假手术组及正常组(P<0.01),6月模型组低于3月模型组(P<0.01)。3.不同药物组模型小鼠治疗后p-p65的表达逐渐降低,PTEN的表达逐渐升高。DEFKJG组,GES组及NYKFP高、中剂量组与6月模型组比较差异均有统计学意义(P<0.01),NYKFP高剂量组p-p65的表达水平明显低于DEFKJG组和GES组(P<0.01),NYKFP高剂量组PTEN的表达水平明显高于DEFKJG组和GES组(P<0.01)。NYKFP高、中、低剂量组间两两相比均具有统计学意义(P<0.01)。4.无论是动情期还是间情期,模型小鼠异位内膜p-p65的表达情况高于在位内膜(P<0.01),p-p65在位内膜表达水平又高于正常的子宫内膜(P<0.01),异位内膜PTEN的表达水平均低于在位内膜(P<0.01),PTEN在位内膜表达水平又低于正常子宫内膜(P<0.01),而且p-p65、PTEN在正常组和模型组小鼠子宫内膜的表达水平随着动情周期的不同阶段而发生变化,在动情期因子p-p65的表达水平显著高于间情期(P<0.01),因子PTEN的表达水平显著低于间情期(P<0.01)。结论1、造模手术操作对子宫腺肌病模型成功率无影响,子宫腺肌病病情程度随病程延长而加重。本次实验研究中,同种异体垂体宫腔移植法建立子宫腺肌病模型,3月、6月模型组造模成功率均达百分百,此种造模法值得推广和应用。2、子宫腺肌病的发生、进展与子宫内膜局部雌激素效应因子PTEN、p-p65的病理表达有关,本研究提示p-p65表达水平升高,PTEN表达水平下降可能成为促使AM发病的原因之一。3、清湿化瘀类方药可通过降低内膜p-p65的表达程度,提高PTEN的表达程度而达到缓解症状,治疗疾病的作用。但调控PTEN、p-p65的作用机制尚需进一步探究。4、高、中剂量NYKFP,DEFKJG及GES均能降低AM内膜组织上p-p65的表达程度,提高PTEN的表达程度,高剂量内异康复片的作用疗效优于DEFKJG、GES,内异康复片对p-p65、PTEN表达调节能力随灌胃药量的减少而降低。该课题实验结果提示在临床上应用清湿化瘀法治疗子宫腺肌病值得进一步推广和研究。5、本实验中PTEN、p-p65的表达受激素的调节而发生周期性的变化,p-p65在动情期明显高于间情期,PTEN在动情期明显低于间情期。因此,这将为临床上治疗AM选择最佳用药时间提供依据,而清湿化瘀法对这种周期性变化无明显的干预作用。