菲律宾蛤仔(Ruditapes philipinarum),为我国四大养殖贝类之一,资源丰富且营养价值高但未得到充分开发利用。糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)是菲律宾蛤仔中重要的生物活性物质,在抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力等方面具有较强的活性。随着人类健康、营养需求的提升以及海洋生物产业增长方式的转变,加强菲律宾蛤仔糖胺聚糖的开发与利用,深入探索其体内作用机制,对进一步推动资源利用向良性循环发展具有重要意义。本实验对菲律宾蛤仔糖胺聚糖的提取、纯化、结构及生物活性进行了研究,为更好的开发利用菲律宾蛤仔提供参考依据。主要研究内容和结果如下:1)以菲律宾蛤仔为原料,从胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶中筛选最适酶种-中性蛋白酶进行试验。在单因素试验的基础上,响应面法优化中性蛋白酶的酶解工艺,获得最佳酶解参数:料液比(w:v)1:1、酶解温度50℃、酶解时间5 h、酶添加量9800 U/g。在该条件下,所得提取物中GAG得率和含量分别为1.04%和 7.13%。2)通过DEAE-650M柱层析分离纯化得到两个组分:GAG-1和GAG-2。其中GAG-1的GAG含量为89.56%,比提取物提高了 82.43%;GAG提取物及GAG-1在一定浓度范围内(20～100mg/mL、2.5～200 μg/mL)均能显著促进体外小鼠脾淋巴细胞增殖,并呈一定的量效关系,且GAG-1的增殖效果明显优于提取物;GAG-1经紫外光谱、红外光谱和核磁共振技术分析显示:结构中含微量核酸、蛋白质;分子中存在羧基、乙酰氨甚、硫酸基等基团,其单体为吡喃型;主要以β-D-Glc(1→4)-方式连接。3)根据《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》研究菲律宾蛤仔GAG提取物对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。该提取物能够促进ConA诱导的T脾淋巴细胞增殖、提高NK细胞活性、促进脾淋巴细胞亚群(CD4+和CD8+)增殖,促进细胞因子(IL-2及IFN-γ)释放、增强巨噬细胞吞噬中性红能力、提高清除碳颗粒能力和血清溶血素的含量。结果表明,菲律宾蛤仔GAG提取物可多途径、多方面提高CTX免疫抑制小鼠的免疫力,具有增强免疫力作用。4)根据《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》研究菲律宾蛤仔GAG提取物对糖尿病小鼠的降血糖作用。其中、高剂量组与糖尿病模型组相比,空腹血糖下降及糖耐量能力达到极显著(P<0.01),效果接近阳性对照组。这两项指标均为阳性,且高剂量GAG提取物对正常小鼠无不良反应。结果表明,菲律宾蛤仔GAG提取物能有效降低糖尿病小鼠的血糖值,具有降血糖作用。