多通道细胞拉伸加载系统的研制及拉伸对ST2细胞增殖的影响

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ltxiong
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:细胞在体内受到静态或动态的生理应力,从而导致细胞内生理生化的改变,这些改变是骨改建、正畸牙齿移动等的生物学基础。研究细胞在机体生理状态下对应力的各种反应是最为理想的,但在体细胞的力学环境复杂多样,细胞生理或病理现象的研究仍依赖于细胞的体外培养技术,因此,研制细胞体外加载实验系统是目前研究细胞力学生物学的主要途径。为研究体外培养细胞在拉伸刺激下的生物学行为的变化,拟开发研制一套对细胞施加周期性拉伸应变的多通道细胞拉伸加载系统。研究选取ST2细胞株来完成体外实验,ST2细胞株是从BC8小鼠骨髓中分离出来的一种间质细胞株,具有骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)的特点。MSCs是具有多向分化潜能的干细胞,来源于中胚层,存在于不同种属的动物及人体内,以骨髓组织中的含量最为丰富。在一定条件下对体外培养的ST2细胞进行不同力值和频率的拉伸刺激,获得促进ST2细胞增殖的最佳条件,构建间充质干细胞体外培养——拉伸刺激模型,为以后的进一步研究奠定良好的基础。方法:1.使用基于C语言程序的单片机嵌入式系统开发软件套件研制多通道细胞拉伸加载系统,通过控制与真空室相连的真空泵,使真空室内的负压产生周期性的变化,从而使密封于其上的细胞培养板弹性基底膜发生形变,对贴附生长的细胞施加牵张应力,实现对细胞施加周期性拉伸应变的作用。2.倒置相差显微镜下观察拉伸应力对ST2细胞的形态学影响:以ST2细胞为实验对象,常规DMEM法培养。将ST2细胞以2x105个/ml的密度接种于6孔BioFlex细胞加力板中,移入37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中,达到细胞周期的同步化后,在无菌条件下将培养板与多通道细胞拉伸加载装置连接。对体外培养的ST2细胞进行加载,48 h后观察ST2细胞的形态学变化。3.检测并分析拉伸应力对ST2细胞增殖的影响:实验分为对照组和加力组,对照组不加载应力,加力组即对ST2细胞分别施加频率为0.125 Hz、0.25 Hz、0.5Hz,大小为5%、10%、15%形变率的周期性牵张应力。加力24 h后,用四唑盐比色(MTT)法检测ST2细胞的增殖情况。利用SPSS13.0统计软件对实验数据进行统计学分析。结果:1.该拉伸加载系统可以同时进行三通道不同形变率的对比实验;加载频率、形变率可以精确调节,操作简单方便,形变率的范围为1%-20%,应变频率在0-0.5Hz范围内可调。2.持续加力48 h后,倒置相差显微镜下观察,ST2细胞在培养板中生长状况良好,贴壁细胞稳定无剥脱现象,逐渐呈方向性生长。3.加力大小为5%,频率为0.125 Hz、0.25 Hz、0.5 Hz;大小为10%,频率为0.125Hz、0.25 Hz;大小为15%,频率为0.25 Hz、0.5 Hz的ST2细胞增殖率较对照组增高,其中5%、0.25 Hz加力组与对照组缺乏统计学差异,其余加力组与对照组都有显著性差异(p<0.01)。与其它加力组相比,大小为15%、频率为0.25Hz的周期性张应力对ST2细胞的促增殖作用最强。大小为10%、频率为0.5 Hz和大小为15%、频率为0.125 Hz的周期性张应力对ST2细胞的增殖有抑制作用。结论:1.多通道细胞拉伸加载系统达到了开发设计要求,提供了对贴壁生长的细胞施加基底膜周期性牵张力的体外实验方法。2.不同力值和频率的牵张力对ST2细胞的促增殖作用影响不同,15%形变率、频率为0.25Hz的周期性张应力有最佳的促增殖效果。成功构建了间充质干细胞体外培养——拉伸刺激模型,完全能满足实验的需要,以ST2细胞作为研究对象的后续实验均可以选择此拉伸力值大小和频率作为理想的加载条件,为保证后续实验的同一性和可比性奠定了基础。
其他文献
一 引言 上压力传感器,是获取有关土压力信息的直接手段。这些信息,对于验证设计的合理性、监控被测结构物的长期安全运行,是必不可少、十分重要的。因此,土压力传感器在交
古希腊哲学家将自然作为独立探索和研究的对象,认为自然界是绚丽未知的,因此,对自然的探求是他们一直追求的目标。而中国古代哲学家则偏爱研究自然与人的相互关系。有的倡导天命
本文简要介绍静电容式倾斜传感器的工作原理、结构和主要性能。由于这种传感器具有小型、价廉、长寿命的优点;且兼备倾斜角度、倾斜角速度输出,因此可以得到广泛地应用。 Th
石河子垦区的下野地、莫索湾灌区,位于准噶尔盆地古尔班通古特大沙漠的南缘,冬季处于大陆性冷高压控制下,气候严寒,降雪少,积雪不稳定,冬麦常受冻死亡。统计这两灌区1960年
目的:单个中切牙反牙合源于牙性反牙合,常发生于乳恒牙交替时,因其异常的咬合关系,并对患儿牙合发育和口腔功能造成干扰,常早期引起家长和口腔医师的重视。临床上常用活动矫治器或
对橡胶植株养分变化规律的研究,迄今仍是胶园营养诊断指导施肥的重要内容之一,近年来国内已有较为系统的研究和报道。(见参考文献1、2、4),基于我们的试验,谈谈对橡胶中苗养
甘蓝型油菜是具有高产、抗逆性强和需肥较多的作物,但在鄂东丘陵地区却有花而不实,产量锐减的现象。因此,从1965年以来,在当地贫下中农与有关单位的帮助下,我们对这一问题开
小麦蚜虫是小麦生产的主要病虫害之一。据俺哨观测:苗期危害,可使麦苗发黄变矮,并可传染黄矮病,造成减产;灌浆危害, Wheat aphids are one of the major pests and disease
光导纤维除用于通信外,还有一类重要的非通信应用一光纤传感器(简称OFS)。OFS可分为传感型和传光型两大类:传感型是利用被测物理量改变(或称调制)光纤中光的强度、相位、偏
目的:   研究下颌磨牙根分叉区解剖形态的差异,并通过牙周临床指标,动态的观察解剖因素与根分叉病变疗效的关系。   材料与方法:   一、研究对象的选择   从2011年3