京郊草莓病毒病调查及病毒检测技术应用

来源 :北京农学院 | 被引量 : 2次 | 上传用户:ruannengjie
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草莓病毒病发生普遍,危害严重,建立与应用重要草莓病毒的快速检测技术筛选无性繁殖材料是防治草莓病毒病的关键。本论文对北京及周边地区的草莓植株进行了田间调查,通过RT-PCR方法检测了侵染或可能侵染草莓:的黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus,SCV)、草莓轻型黄边病毒(Strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)、草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)、草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)等6种病毒,共检测到除SMYEV的5种病毒,并存在复合侵染现象。对北京昌平及河北赤城的草莓种苗进行了检测,在草莓种苗繁育的不同时期检测结果不一致。通过筛选特异性引物对RT-PCR反应体系进行了优化,确定了 CMV、SMoV、SVBV优化后的检测体系。比较了 CTAB试剂盒法、改良SDS法、高盐低pH法等3种提取草莓叶片DNA的方法,并分别通过分光光度法、凝胶电泳法和PCR法检测了三种方法提取的DNA。结果表明CTAB试剂盒法简单快速,提取DNA的质量和纯度较高,能较好的用于草莓叶片中SVBV的PCR检测。通过PCR法及序列测定获得了 SVBV北京分离物的全长核苷酸序列,与Caulimovirus的不同病毒及分离物的序列进行同源性分析与系统发育树的构建,SVBV北京分离物美国分离物的同源性为84.29%,存在地理差异。对SCV的RT-LAMP反应体系进行了测定,就影响反应结果的条件进行了分析,并对反应体系的灵敏度和特异性进行了测定。此方法灵敏度高于RT-PCR,反应时间短,提高了检测效率。
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