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蒲公英甾醇具有抗乳腺炎及抑制血管炎症的作用,由于其在蒲公英中含量低,如何提高蒲公英中蒲公英甾醇含量具有重要意义。本试验以丹东蒲公英(Taraxacum antungense Kitag.)为试材,研究茉莉酸甲酯(MeJA)对丹东蒲公英总三萜含量及生物合成途径关键酶基因表达量影响。同时,克隆丹东蒲公英甾醇生物合成第一个关键酶鲨烯合酶(TaSS)基因,获得了TaSS基因过表达株系,确定TaSS基因在蒲公英甾醇生物合成中的功能。克隆TaSS基因启动子片段并分析该基因启动子顺式作用元件。本试验克隆了茉莉酸信号途径核心转录因子TaMYC2并筛选出TaMYC2基因过表达的毛状根系,初步分析TaMYC2在蒲公英甾醇生物合成途径中的功能。主要结果如下:1.分析生物合成途径关键基因在茉莉酸甲酯诱导下的表达模式,结果表明TaFPS1、TaFPS2、TaHMGR3、TaMYC2、TaMVD、TaHDR和TaSS在处理前期表达量上调,后期表达量受抑制。处理期间总三萜含量均高于对照,并且在处理3 h达到最高值,表明茉莉酸甲酯可以提高相关基因表达量来促进蒲公英总三萜化合物含量积累。2.根据丹东蒲公英转录组数据,克隆出TaSS基因并构建了TaSS过表达载体,通过根癌农杆菌介导法将TaSS基因进行过表达分析,获得了2个转基因株系OE-1和OE-2,TaSS基因表达量分别升高了12.86和7.04倍,转基因株系中蒲公英甾醇含量提高。结果表明,TaSS基因过表达促进蒲公英甾醇合成,表明TaSS基因在蒲公英甾醇生物合成途径中的具有关键作用。3.利用染色体步移法成功克隆TaSS基因启动子并对TaSS基因启动子进行顺式作用元件分析。结果表明,该启动子片段中含有机械损伤响应元件、茉莉酸响应元件、生长素响应元件、脱落酸响应元件、光响应元件、水杨酸响应元件、MYB recognition site、CAAT-box和TATA-box等。这些结果表明,TaSS基因的表达可能受多种激素和机械损伤的调控作用。4.本试验克隆出TaMYC2基因并构建了TaMYC2过表达载体,通过发根农杆菌介导法将TaSS基因在毛状根中进行过表达分析,得到了3个转基因毛状根系,发现TaMYC2和TaSS基因表达量均显著上调,并且毛状根中蒲公英甾醇含量升高。结果表明,TaMYC2基因可能通过调控TaSS基因表达从而提高蒲公英甾醇含量。